LNCap細胞的培養(yǎng)和傳代嚴格由ATCC建議的操作步驟進行,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,共1.0微克)共轉(zhuǎn)染(6孔板中每孔的量),并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實驗步驟進行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24小時后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉(zhuǎn)染效率。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2細胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達到95%的細胞融合。轉(zhuǎn)染48小時后,分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率。每孔培養(yǎng)體積均為100μL,細胞數(shù)目在105左右。上海roche轉(zhuǎn)染試劑報價
超級好用的siRNA和miRNA轉(zhuǎn)染試劑——HiPerFect高效沉默低脫靶:HiPerFect是小RNA轉(zhuǎn)染試劑,這種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子可以在siRNA低至100pM濃度的條件下轉(zhuǎn)染(推薦濃度是1nM-5nM)。保持高效基因沉默的同時降低脫靶效應(yīng),正是這一產(chǎn)品的精髓所在。除了siRNA,HiPerFect還能夠用于miRNA模擬物和***劑的轉(zhuǎn)染,滿足miRNA功能分析的需要。操作簡單,方便快速:HiperFect轉(zhuǎn)染試劑的方便程度也是***的,甚至***之內(nèi)可以完成再次接種、轉(zhuǎn)染到檢測結(jié)果!這對于高通量反應(yīng)簡直是求之不得的福音:轉(zhuǎn)染前將細胞按比例接種到24孔培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)基可以是含有***和血清的,在37度培養(yǎng)箱中保溫。polviet轉(zhuǎn)染試劑配制隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平(Biophen 顯色檢測)。
用LipoD293?體外DNA轉(zhuǎn)染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒到HEK293細胞中。轉(zhuǎn)染24小時后,細胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側(cè))和熒光成像圖(右側(cè))。對懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較30毫升的293F細胞分別使用LipoD293?試劑、293fectin、Xfect和Fugene6等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將pEGFP-6xHis質(zhì)粒導(dǎo)入細胞表達,用量為LipoD293?試劑,20微克,所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用30微克質(zhì)粒DNA。
基于陽離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內(nèi)吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類,前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,適用也較為廣范。以上單一成分的轉(zhuǎn)染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉(zhuǎn)染試劑,不局限于單一成分,混合了不同 配方的脂類(非脂質(zhì)體)、加上蛋白質(zhì)組分、以及各種的 成分,兼具了轉(zhuǎn)染效率高和細胞毒性小的優(yōu)勢,且操作更加簡單,易于高通量。將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細胞懸液中,前后移動培養(yǎng)皿,混合均勻;
Lipofectamine RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是先進、高效的siRNA輸送解決方案。目前尚無其他siRNA轉(zhuǎn)染試劑能夠在***的細胞系中(包括常見細胞類型、干細胞、原代細胞以及歷來難轉(zhuǎn)染的細胞類型)提供如此簡便、高效的siRNA輸送效果。
高效
可在低siRNA濃度下獲得優(yōu)良的轉(zhuǎn)染效果
相對于其他的siRNA轉(zhuǎn)染試劑,Lipofectamine RNAiMAX 轉(zhuǎn)染試劑可以獲得更佳的基因***效果。同在10 nM和1 nM p53 siRNA下,Lipofectamine RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑實現(xiàn)了更高的有效***細胞/未轉(zhuǎn)染細胞比率,超過其他RNAi試劑。 連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理.原代細胞轉(zhuǎn)染試劑
我們希望把mRNA轉(zhuǎn)染進入原代細胞,那**適合的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品就是Lipofectamine MessengerMAX?或是Neon電轉(zhuǎn)儀。上海roche轉(zhuǎn)染試劑報價
將膠質(zhì)瘤干細胞(3×105)接種至6孔板中,然后使用riboFECTCP轉(zhuǎn)染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉(zhuǎn)染進膠質(zhì)瘤干細胞(DP3321、DP7857)中,48h后,qRT-PCR和westernblots檢測siRNA***效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為46.32%、49.71%和43.64%,DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為53.21%、47.46%和46.31%。將1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCPRegent在30μlriboFECTTMCPBuffer中混合以產(chǎn)生轉(zhuǎn)染混合物。然后將混合物加入DMEM(siRNA濃度:50nM)中,與原代小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)48h。RT-PCR和westernblot分析檢測轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TREM-1siRNA后******了OGD誘導(dǎo)的TREM-1、p-SYK、SYK、CARD9、p-p65和NLRP3的上調(diào)。上海roche轉(zhuǎn)染試劑報價
上海儒安生物科技有限公司是一家生產(chǎn)型類企業(yè),積極探索行業(yè)發(fā)展,努力實現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新。上海儒安生物科技是一家有限責(zé)任公司企業(yè),一直“以人為本,服務(wù)于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽,持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。以滿足顧客要求為己任;以顧客永遠滿意為標(biāo)準(zhǔn);以保持行業(yè)優(yōu)先為目標(biāo),提供***的細胞轉(zhuǎn)染試劑,ecl發(fā)光液,cck8細胞增殖,內(nèi)參抗體。上海儒安生物科技自成立以來,一直堅持走正規(guī)化、專業(yè)化路線,得到了廣大客戶及社會各界的普遍認可與大力支持。