細(xì)胞凍存簡(jiǎn)介生物醫(yī)學(xué)科研實(shí)驗(yàn)1、培養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作大致同細(xì)胞傳代培養(yǎng)的前6個(gè)步驟。簡(jiǎn)言之：用紫外消毒等消毒超凈工作臺(tái)面；清洗消毒手部；觀察細(xì)胞；預(yù)熱培養(yǎng)用液；點(diǎn)燃酒精燈；取出巴斯德吸管、刻度吸管等插在無(wú)菌試管內(nèi)。凍存液的配置方法：按如下比例配置：10%甘油+90%培養(yǎng)基，或者10%DMSO+90%培養(yǎng)基。用于配制凍存液的培養(yǎng)基中小牛血清濃度適量提高至20%或更高。所用的甘油需事先高壓滅菌，如使用DMSO，則不需要任何滅菌措施。細(xì)胞凍存液可快速冷凍，可直接置于-80℃冰箱冷凍，長(zhǎng)期保存，不需要程序性降溫。上海bi細(xì)胞凍存液配方

胞培養(yǎng)凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的低溫保存完全培養(yǎng)基。保護(hù)您的細(xì)胞及研究結(jié)果：從低溫保存復(fù)融細(xì)胞后，細(xì)胞復(fù)蘇率和活力增加即用型凍存混合物——不需逐次用多種試劑自行配制凍存液OrderingInformation貨號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格單價(jià)(CNY)數(shù)量12648010Recovery?CellCultureFreezingMedium50mL2,436.00為什么選擇Recovery?細(xì)胞培養(yǎng)凍存培養(yǎng)基？為確保細(xì)胞培養(yǎng)能快速獲得準(zhǔn)確結(jié)果，妥當(dāng)?shù)蜏乇４婕?xì)胞是您的首要考慮事項(xiàng)之一。富含大量高活力細(xì)胞的穩(wěn)健、健康細(xì)胞培養(yǎng)可以讓您更快開展試驗(yàn)，同時(shí)對(duì)結(jié)果更有信心。在貼壁和懸浮細(xì)胞系的低溫保存中，Recovery?可使細(xì)胞活力平均增加25%Recovery?是一種優(yōu)化的完全營(yíng)養(yǎng)成分配方，可以避免繁雜的DMSO混勻操作上海快速細(xì)胞凍存液配比無(wú)血清細(xì)胞凍存液說(shuō)明書.

3、取待凍存的細(xì)胞用胰蛋白酶消化（方法見細(xì)胞的傳代部分）。用含血清的培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來(lái)，將細(xì)胞懸液吸到無(wú)菌離心管中，800r/min離心5min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀。如果是懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，則可直接離心收集細(xì)胞。4、在沉淀中加入適量?jī)龃嬉褐瞥杉?xì)胞懸液，細(xì)胞濃度宜大，300萬(wàn)/mL左右，一般一個(gè)中方瓶中的細(xì)胞濃縮至1mL，凍存液中為宜。5、細(xì)胞懸液裝入凍存管中。用封口膜封裹瓶口，做好標(biāo)記。6、凍存管在4℃下存放30min，轉(zhuǎn)放-20℃中30min，再轉(zhuǎn)入-70℃過(guò)夜，之后即可放入液氮中長(zhǎng)久保存，注意進(jìn)行登記。

細(xì)胞凍存常用凍存液的成分如下：20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過(guò)濾后分裝保存?zhèn)溆?。注意事?xiàng)：1.DMSO不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過(guò)濾除菌。2.DMSO要用新的,而且要避光保存。3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。DMSO在凍存液中的作用：DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過(guò)細(xì)胞膜，降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點(diǎn)下降，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。

4.逐滴加入5-7mL的預(yù)熱的培養(yǎng)基到15mL的離心管中，加入的同時(shí)輕輕混勻。5.室溫以300xg離心5分鐘。6.吸出培養(yǎng)基，使細(xì)胞沉淀完好無(wú)損。使用2mL血清移液管輕輕將細(xì)胞沉淀重懸于1mL的培養(yǎng)基中。7.將0.5mL的細(xì)胞混合物轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的預(yù)包被的6孔板的培養(yǎng)孔中（例如，每個(gè)凍凍管可以鋪板兩個(gè)孔）。8.將培養(yǎng)板放入37°C培養(yǎng)箱。快速前后左右的搖晃培養(yǎng)板數(shù)次，將細(xì)胞聚集體分布均勻。24小時(shí)內(nèi)不要移動(dòng)培養(yǎng)板。注意：解凍復(fù)蘇后如果只能觀察到少數(shù)的未分化的集落BI細(xì)胞凍存液是什么成分?上?？焖偌?xì)胞凍存液配比

無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液，減少各類霉菌和支原體等的污染，確保凍存細(xì)胞安全.上海bi細(xì)胞凍存液配方

細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一，起到了細(xì)胞保種的作用。中文名細(xì)胞凍存儲(chǔ)存方式將細(xì)胞放在低溫環(huán)境細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過(guò)程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開***開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。上海bi細(xì)胞凍存液配方

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