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基于脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體兩種。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內(nèi)。目前應(yīng)用比較***的是帶正電的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,DNA并沒有預先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經(jīng)過內(nèi)吞被導入細胞。此方法操作簡單,重復性好,在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率,但具有一定的細胞毒性,可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響,需要去除血清。但相對于連續(xù)細胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。上海polviet轉(zhuǎn)染試劑配方
在選擇轉(zhuǎn)染方法時,需考慮您希望輸送的運載物(DNA、RNA或蛋白質(zhì))以及您希望轉(zhuǎn)染的細胞類型。您可通過下表選擇各類陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑和Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。我們提供了各種DNA、siRNA、寡核苷酸和RNA輸送選擇,讓您可以對自己的結(jié)果更加自信.***的輸送效果—可轉(zhuǎn)染多種類型的細胞無毒性作用—您之所以能看到結(jié)果,是因為核酸存在,而不是因為試劑需要的優(yōu)化工作更少—針對大多數(shù)細胞類型提供了快速、簡便的實驗方案連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理。但由于此類細胞經(jīng)歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,它們在培養(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內(nèi)狀態(tài)。轉(zhuǎn)染試劑價格轉(zhuǎn)染試劑實現(xiàn)了更高的有效***細胞/未轉(zhuǎn)染細胞比率,超過其他RNAi試劑。
細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中**常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用***等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢***、腺***和腺相關(guān)***等**常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因***,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都很性感電轉(zhuǎn)化化學轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學研究中**常用的轉(zhuǎn)染方法,主要包括兩類:陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。
轉(zhuǎn)染48小時后,使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進行成像(左側(cè)四幅圖),A:LipoD293;B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene6.帶有6xHis標記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術(shù)實現(xiàn)分離。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進行Coomassie亮藍染色(右上圖E),道1為LipoD293293、道2為標準蛋白分子、道3為Xfect、道4為293fectin和道5為Fugene6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進一步定量(見右下圖F)。產(chǎn)生慢***的比較通過LipoD293?試劑(升級版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個cDNAs共轉(zhuǎn)染進293T細胞。一個GFP載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來測定慢***的滴度。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細胞,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1微升(上圖)和10微升(下圖)。轉(zhuǎn)染后6h觀察細胞狀態(tài),并更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細胞,用PBS洗滌3次以上,以備RNA抽提。
原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖,因此,它們的形態(tài)學和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據(jù)支配地位,從而造成了細胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。細胞轉(zhuǎn)染必備——高效低毒轉(zhuǎn)染試劑.上海神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑選購
該試劑可將RNA導入多種細胞系,包括原代細胞和懸浮細胞.上海polviet轉(zhuǎn)染試劑配方
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