讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。
***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50
注意事項
CCK8法檢測細胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響，應事先去除。如果實驗條件中存在還原物質，需單獨測定還原物質的空白吸光度。如果還原物質的吸光度很小，可以忽略不計；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測。 這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.浙江cck8視頻
在做一些***毒性試驗時，比如做鐵死亡途徑時，我們加入一個***叫C1，這個時候就需要提前換液，其實我們試過，還是會有一些影響。所以這時我們用中性紅檢測。我們實驗室，通常會用20%的硫酸銅溶液放到細胞孵箱下層，預防******。理應說，硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子，是不會揮發(fā)的。但是每次只要是新?lián)Q的硫酸銅溶液再做CCK-8，結果總是不好，我也不知道是什么原因。之前在我們實驗室有發(fā)生過這樣的事情，這種有深有淺的才是該有的結果。我想說的是在有能力選擇范圍內，盡量選擇好一點的試劑，免得浪費時間。浙江cck8視頻***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時，經常會用到CCK-8。
培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應，產生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設定空白對照。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度，
細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結合流式的雙標準來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細胞，設置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實驗組中，每孔加入細胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時請問合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?
五、實驗注意事項：·若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。·如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當使用標準96孔板時，貼壁細胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基)。使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑.浙江cck8視頻
在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.浙江cck8視頻
CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實驗時研究生二年級的時候，當時用的***個盒子是Sigma的，當時的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma。那個盒子給了我莫大的鼓勵，因為在那之前做分子克隆一直都不是很順利。這個盒子是我的碩士老板從美國帶回來的，品質有保證，***的結果也是很好的。后面在做CCK-8的實驗時，我們在有選擇的情況下都會買sigma，下圖2是sigma官網的截圖。其實也不貴，只是到貨時間太慢。
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