細胞凍存常用凍存液的成分如下：

20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止細胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?

注意事項：

1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過濾除菌。

2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存。

3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。

DMSO在凍存液中的作用： DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過細胞膜，降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲，避免了細胞過分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點下降，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷。 采取逐級降溫保存：4℃放置20min，-20℃放置30min，-70℃?過夜，***置于液氮罐中長期存儲。廣州無血清細胞凍存液加不加血清

細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。

細胞凍存和復蘇的原則：

慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷，引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進而促使細胞死亡。 成都bi 細胞凍存液需要4度預冷dmso在凍存液中的作用?

用以下方法凍存細胞:

4℃放置15-30分鐘

（一定不能省略該步驟，否則凍存液無法完全滲透過細胞膜進入細胞起保護作用）

①     緩速降溫方法（以使用需異丙醇的Nalgene程序降溫盒為例，冷凍細胞的過程中可以輔助實現(xiàn)緩慢降溫，以達到近似于1℃/分鐘）：-80℃過夜→液氮長期保存。

（不推薦在-80℃長期保存；異丙醇易揮發(fā)，并且容易吸收空氣中的水分，建議使用5次后更換）

②     逐步降溫法：-20℃保存2小時，然后-80℃中保存2小時，隨后可以在-196℃液氮中長期保存。

脫水

當生物材料處于上述條件（2）的情況下，細胞脫水則會開放相關(guān)壓力對細胞直接傷害的“大門”。

4. 細胞內(nèi)冰晶的形成

雖然一些***或組織能夠耐受細胞外的冰晶，但是在凍存過程的中如果在細胞內(nèi)形成了任何微小冰晶時對細胞來說都是致命的。

凍存液 凍存保護劑（cryoprotectant）又或者說是凍存液是一種用來保護生物組織免受凍存?zhèn)Φ奈镔|(zhì)。其實在現(xiàn)實生活中，

自然的凍存保護劑可以在北極或者南極的昆蟲，魚類，兩棲動物等生物中找到，這樣的保護劑（抗凍復合物，抗凍蛋白）能夠在他們的身體中使寒冷冬季的嚴寒傷害降到比較低

細胞凍存液需要現(xiàn)用現(xiàn)配?

根據(jù)細胞培養(yǎng)皿的大小加入適量細胞培養(yǎng)基后進行細胞常規(guī)培養(yǎng)。保存條件：4℃保存，有效期一年。若長不用可凍存于-20℃，有效期三年。

產(chǎn)品質(zhì)量：無血清細胞凍存液經(jīng)過嚴格的內(nèi)，滲透壓，pH檢測，并經(jīng)過0.1um濾膜過濾，確保產(chǎn)品不含有細菌，支原體等污染。

注意事項：1.請選擇對數(shù)生長期細胞進行凍存，由于DMSO對細胞有一定的損傷，凍存細胞分裝后應盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱，減少在室溫存放時間。如遇特殊情況，可先短暫放置于4℃并盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱。 細胞的凍存密度一般是多少?江蘇加完細胞凍存液是什么顏色

無血清細胞凍存液說明書.廣州無血清細胞凍存液加不加血清

凍存細胞類型：臍血及臍帶組織、外周血、間充質(zhì)干細胞、多能干細胞、組織樣本等

① 用于減輕冷凍和解凍復蘇期間由溫度引起的分子應激反應

② 分別以2%、5%或10%USP級的二甲基亞砜（DMSO）預先配制即用型細胞凍存液

凍存細胞類型：臍血及臍帶組織、外周血和骨髓

① BloodStor®55-5以55%（重量/體積）的DMSO（USP）級、5%（重量/體積）的葡萄糖-40（USP）級和注射液（WFI）級別的水預先配制

② BloodStor®100含有**（重量/體積）的DMSO（USP級）

廣州無血清細胞凍存液加不加血清

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