細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細(xì)胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項。

MTT實(shí)驗(yàn)操作

1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：

2、在對照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時； **藥敏試驗(yàn)：這個是用的比較廣的，我見過做**的團(tuán)隊，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買。北京cck8凋亡

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。

***率（％）= [（對照孔吸光度-實(shí)驗(yàn)孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項

CCK8法檢測細(xì)胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng)，如果實(shí)驗(yàn)處理條件中存在還原劑的影響，應(yīng)事先去除。如果實(shí)驗(yàn)條件中存在還原物質(zhì)，需單獨(dú)測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測。 天津共培養(yǎng)細(xì)胞cck8細(xì)胞增殖與毒性檢測實(shí)驗(yàn)方法及經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-CCK-8 法.

一直都像個新手，從未老道過。所有新手的迷茫與無奈我**能體會?？吹綀@子里有一些同學(xué)在問有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情，當(dāng)初我也和他們一樣，像個被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語。希望我寫的這些非專業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們。當(dāng)然仁者見仁智者見智，我寫的只是個人實(shí)驗(yàn)心得，就供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步。實(shí)驗(yàn)是簡單的，道路是曲折的，時間就是用來浪費(fèi)的，科研就是自娛自樂使勁折騰。

CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)的一個盒子。

特點(diǎn)不同1、CellCountingKit-8：靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好；操作簡便，省時省力；水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞；無需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對細(xì)胞毒性低；適合于高通量***篩選。2、MTT法：特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。三、應(yīng)用不同1、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、**藥敏試驗(yàn)。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及**放射敏感性測定等。CCK8原理、優(yōu)勢和步驟.天津cck8每次數(shù)據(jù)都不一樣

微生物對細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn)。北京cck8凋亡

CCK8，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2、MTT法：其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。北京cck8凋亡

上海儒安生物科技有限公司位于真南路4268號2幢J1718室，擁有一支專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊。專業(yè)的團(tuán)隊大多數(shù)員工都有多年工作經(jīng)驗(yàn)，熟悉行業(yè)專業(yè)知識技能，致力于發(fā)展上海儒安生物的品牌。公司以用心服務(wù)為重點(diǎn)價值，希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力，將從事生物技術(shù)、物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)服務(wù)，軟件開發(fā)，電子商務(wù)(不得從事增值電信、金融業(yè)務(wù))，化工產(chǎn)品及原料(除危險化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、民用物品、易制毒化學(xué)品)、實(shí)驗(yàn)窒設(shè)備的銷售。等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。自公司成立以來，一直秉承“以質(zhì)量求生存，以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營理念，始終堅持以客戶的需求和滿意為重點(diǎn)，為客戶提供良好的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體，從而使公司不斷發(fā)展壯大。