用途：

***篩選、

細胞增殖測定、

細胞毒性測定、

**藥敏試驗等。

所需設備及儀器：

10ul，100-200ul及多通道移液器

酶標儀（帶有450nm濾光片）

96孔培養(yǎng)板

二氧化碳培養(yǎng)箱

培養(yǎng)0.5-4小時:細胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續(xù)培養(yǎng)，以確認比較好條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少，需要較長的顯色時間（5-6小時）。

測定450nm吸光度：建議采用雙波長進行測定，檢測波長450-490nm，參比波長600-650nm。 靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好.上海cck8細胞生長曲線

實驗原理：CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。江蘇dmso在cck8的溶劑對照酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；

CCK-8的原理

所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢，因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低，有些細胞在***處理后，可能活細胞數(shù)不變，但是代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）？當然也有解決的辦法，下期給大家介紹。因此可利用這個原理進行細胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時檢測讀數(shù)。用途及常用的公

特點不同1、CellCountingKit-8：靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好；操作簡便，省時省力；水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞；無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低；適合于高通量***篩選。2、MTT法：特點是靈敏度高、經(jīng)濟。三、應用不同1、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選、細胞毒性試驗以及**放射敏感性測定等。接種時注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數(shù)量不一致。

CCK-8（CellCountingKit-8）細胞活性和增殖檢測是醫(yī)學研究中常用的實驗技術，其原理是該試劑中含有WST-8，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。以下是CCK-8檢測的具體步驟：細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下)。在CCK-8試劑盒中，**主要的化學藥品是WST-8.上海cck8 懸浮細胞

CCK8細胞增殖實驗檢測原理.上海cck8細胞生長曲線

在做每個東西之前，都要搞清楚這個東西是什么。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進行細胞計數(shù)的一個盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和細胞增殖相關的實驗都可以。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中，**主要的化學藥品是WST-8，化學名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。它的**基團和MTT是一樣的，是MTT的升級版本。在電子耦合試劑（也就是細胞是活的，有呼吸，有能量代謝）存在的情況下，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan)。活細胞越多，產(chǎn)生的Formazan就越多，顏色也會越深（如圖1，來自于Sigma）。上海cck8細胞生長曲線

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