CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實驗一：細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。主要是重復(fù)性優(yōu)于MTT；江蘇cck8吸光度小于0.1但有趨勢

細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下)。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù))。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4.用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。5.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(在37℃，5%CO2的條件下)。北京cck8 od值統(tǒng)計方法細胞增殖測定：細胞增殖實驗在很多領(lǐng)域都會用到，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等。

切記一定要使用無血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，一是可以排除血清對細胞生長的影響；二是血清的存在會對吸光度的測量產(chǎn)生影響。以上是MTT比色法的介紹，MTT比色法因為涉及到吸出培養(yǎng)基溶解沉淀的操作，所以更適用于貼壁細胞，懸浮細胞比較好選用CCK8檢測細胞增殖，下面給大家介紹一下CCK8操作的注意事項。CCK8實驗操作CCK8的優(yōu)勢在于對細胞沒有毒性，可以直接加入細胞中長時間孵育，而不用考慮試劑本身對細胞帶來的影響。向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液。如若檢測的細胞增殖或毒性試驗，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當(dāng)時間，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測液。

CCK8檢測細胞增殖/毒性的方法：

1.將處于對數(shù)生長期的各實驗組細胞胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸成細胞懸液，并計數(shù)。

2.根據(jù)細胞生長快慢決定鋪板細胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well），每組3-5重復(fù)，每孔100-200μl培養(yǎng)基。根據(jù)實驗設(shè)計決定鋪板數(shù)量（如需要檢測5天，則鋪5張96孔板），我們以1000 cell/well，5復(fù)孔，200μl培養(yǎng)基，檢測5天為例，各實驗組需要細胞數(shù)量為1000×5×5個細胞，從計數(shù)好的細胞懸液中取出所需的細胞量和完全培養(yǎng)基混勻，**終體積為200×5×5μl。 細胞增殖與毒性檢測實驗方法及經(jīng)驗總結(jié)-CCK-8 .

統(tǒng)一鋪好后，待細胞完全沉淀下來后，在顯微鏡下觀察各實驗組的細胞密度，如果密度不均勻，則固定一組，微調(diào)其他組細胞的量再次鋪板（如：發(fā)現(xiàn)NC組細胞較多，降低細胞量再次鋪板），放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.從鋪板后第二天開始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為100μl，則加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為200μl，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。用加了相應(yīng)量細胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。不同的種板數(shù)對檢測***的IC50影響大嗎？浙江cck8 換液后繼續(xù)培養(yǎng)

使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑.江蘇cck8吸光度小于0.1但有趨勢

CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數(shù)量，在一定細胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細胞數(shù)成正比。

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