在做每個東西之前，都要搞清楚這個東西是什么。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進行細胞計數(shù)的一個盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和細胞增殖相關的實驗都可以。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中，**主要的化學藥品是WST-8，化學名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。它的**基團和MTT是一樣的，是MTT的升級版本。在電子耦合試劑（也就是細胞是活的，有呼吸，有能量代謝）存在的情況下，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan)。活細胞越多，產(chǎn)生的Formazan就越多，顏色也會越深（如圖1，來自于Sigma）。在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.湖北mtt cck8

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設定空白對照。另外，血清不影響測定，所以我用CCK-8來測定病毒對細胞活性的影響或者某個***對病毒復制的影響時，我都小心翼翼的測很多個時間點，說實話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。湖北cck8標準曲線CCK8細胞增殖實驗檢測原理.

實驗材料及試劑96孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標儀等；細胞、CCK8等。實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞，每孔按4×103個接種至96孔板中，每組設置8個復孔，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后，用酶標儀測波長為450nm的OD值。實驗重復3次，取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果。按公式計算生長***率＝[(對照組OD－實驗組OD)/對照組OD]×**，以分組為橫坐標，生長***率為縱坐標，繪制細胞生長

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設定空白對照。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度，CCK-8用途：***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗.

五、實驗注意事項：·若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當使用標準96孔板時，貼壁細胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基)。CCK8細胞增值檢測實驗簡介.上海cck8檢測原理

在電子耦合試劑（也就是細胞是活的，有呼吸，有能量代謝）.湖北mtt cck8

目前全球銷售產(chǎn)業(yè)發(fā)展主要有美國波士頓—劍橋的醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)集聚區(qū)、德國圖特林根的醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)集聚區(qū)、日本富山縣的醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)集聚區(qū)、印度班加羅爾的仿制藥產(chǎn)業(yè)集聚區(qū)等九大發(fā)展模式。而我國仍以醫(yī)藥服務和醫(yī)藥商品為主，整體收入規(guī)模偏小。生產(chǎn)型項目新市場加入通常耗資巨大，單一的資本進入往往會形成極大的資本壓力，因此一些重大的生產(chǎn)型項目往往都會通過數(shù)家有實力的資本進行組合資本。醫(yī)藥健康上下游未整體規(guī)劃，醫(yī)用物流公司十分分散，許多下游需求店鋪及用戶因物流體系不完善而放棄該種醫(yī)藥的引入和使用。由于醫(yī)用藥保存條件要求十分高，存儲倉庫與冷藏運輸車等的建設與運行成本便居高不下，使得醫(yī)藥冷鏈物流從建設到運營中的成本都遠超于傳統(tǒng)物流成本。除此之外，我國支付端仍是以醫(yī)保支付為主，細胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細胞增殖，內(nèi)參抗體鏈的延伸以及消費醫(yī)藥市場價值的獲取也需要進一步探索解決的途徑。從細胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細胞增殖，內(nèi)參抗體的健康發(fā)展來看依舊有待完善。湖北mtt cck8