蛋白質(zhì)組學(xué):質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)組學(xué)的基本原理主要是通過(guò)測(cè)定被測(cè)樣品離子的理化性質(zhì)來(lái)進(jìn)行分析,根據(jù)樣品的質(zhì)量譜圖和相關(guān)信息從而得到定性和定量結(jié)果。目前,蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析一般是根據(jù)保留時(shí)間(retentiontime)、質(zhì)荷比(m/z)、離子強(qiáng)度(intensity)這三個(gè)維度對(duì)肽蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量,即3D蛋白質(zhì)組學(xué)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)在3D蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)之上增加了第四維度,離子淌度(mobility),主要根據(jù)離子的形狀和截面對(duì)離子進(jìn)行分離,能夠區(qū)分m/z差值非常小的肽段,使低豐度蛋白信號(hào)能夠被區(qū)分和識(shí)別出來(lái)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)基于timsTOFPro質(zhì)譜儀,結(jié)合PASEF(ParallelAccum...
LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)):在非標(biāo)記策略的定量模型中,主要涉及兩種不同的算法:其一,以肽段的色譜峰積分面積為基礎(chǔ),通過(guò)比較一對(duì)生物樣品中相對(duì)應(yīng)到蛋白質(zhì)酶解多肽的色譜積分面積而得到兩者的相對(duì)豐度;其二,以肽段被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)為基礎(chǔ),通過(guò)歸一化來(lái)表征被檢測(cè)蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度。非標(biāo)記技術(shù)認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率(Counts)與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來(lái),從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。蛋白質(zhì)組學(xué)研究的首要任務(wù)是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī)、可靠、有效的技術(shù)。貴陽(yáng)PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)...
蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說(shuō)大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對(duì)含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊龋舶▽?duì)這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模,既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量,也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達(dá)量與實(shí)際對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡(jiǎn)單地測(cè)試了酵母中mRNA和對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的...
蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說(shuō)大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測(cè)某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對(duì)含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊龋舶▽?duì)這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模,既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量,也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達(dá)量與實(shí)際對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡(jiǎn)單地測(cè)試了酵母中mRNA和對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的...
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):等電聚焦:等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質(zhì)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點(diǎn)進(jìn)行分離,等電聚焦中,蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個(gè)連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸,在電場(chǎng)中形成正極為酸性,負(fù)極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點(diǎn)的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場(chǎng)中移動(dòng);當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點(diǎn)位置時(shí),其靜電荷數(shù)為零,在電場(chǎng)中不再移動(dòng),據(jù)此將蛋白質(zhì)分離。蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(gen...
蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)組一詞,源于蛋白質(zhì)與基因組兩個(gè)詞的組合,意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”,即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過(guò)程的整體而全方面的認(rèn)識(shí)。蛋白質(zhì)組的研究不只能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。通過(guò)對(duì)正常個(gè)體及病理個(gè)體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,它們可成為新藥物設(shè)計(jì)的分子靶點(diǎn),或者也會(huì)為疾病的早期診斷提供分子標(biāo)志。確實(shí),那些...
蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細(xì)胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)蛋白組進(jìn)行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能、作用機(jī)制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測(cè)蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測(cè)的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學(xué)。對(duì)人類而言,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究終究要服務(wù)于人類的健康。北京定量蛋白組學(xué)分析價(jià)格蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細(xì)胞、組織或...
PRM靶向蛋白組學(xué):PRM技術(shù)是一種根據(jù)已知實(shí)測(cè)信息或質(zhì)譜檢測(cè)規(guī)律的假定信息對(duì)樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行靶向定量的技術(shù)。該技術(shù)主要應(yīng)用儀器為QExactive系列質(zhì)譜儀,首先以四極桿作為質(zhì)量過(guò)濾器,特異性地選擇與預(yù)先設(shè)定質(zhì)荷比相同的肽段離子(母離子)通過(guò),隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過(guò)Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級(jí)質(zhì)譜信息。四極桿的高選擇性離子過(guò)濾與Orbitrap高分辨率測(cè)量技術(shù)的結(jié)合使得PRM技術(shù)有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。在確保數(shù)據(jù)質(zhì)量的前提下,為了在一次分析中檢測(cè)更多的蛋白質(zhì),可用預(yù)置PRM(ScheduledPRM,s...
常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué):Labelfree多肽組學(xué):顧名思義,就是不使用任何標(biāo)記方法,直接對(duì)肽段進(jìn)行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析。實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)單,只需要對(duì)蛋白進(jìn)行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機(jī)。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計(jì)數(shù)(Spectralcount),常用的是峰面積。不過(guò),由于質(zhì)譜采集時(shí)只選取topN的母離子進(jìn)行二級(jí)碎裂和MS2檢測(cè),所以會(huì)丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白組學(xué):TMT全稱是TandemMassTag,是經(jīng)典化學(xué)標(biāo)記試劑,普遍用于差異表達(dá)蛋白質(zhì)組分析研究中。該技術(shù)采用6重、10重或16重同位素標(biāo)簽,與肽段的氨基發(fā)生共價(jià)結(jié)合反...
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):生物質(zhì)譜:生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù),其基本原理是樣品分子離子化后,根據(jù)不同離子之間的荷質(zhì)比(M/E)的差異來(lái)分離并確定分子量。對(duì)于經(jīng)過(guò)雙向電泳分離的目標(biāo)蛋白質(zhì)用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對(duì)這些肽段用質(zhì)譜進(jìn)行鑒定與分析。目前常用的質(zhì)譜包括兩種:基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(label free)定量策略。廣...
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):生物質(zhì)譜:生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù),其基本原理是樣品分子離子化后,根據(jù)不同離子之間的荷質(zhì)比(M/E)的差異來(lái)分離并確定分子量。對(duì)于經(jīng)過(guò)雙向電泳分離的目標(biāo)蛋白質(zhì)用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對(duì)這些肽段用質(zhì)譜進(jìn)行鑒定與分析。目前常用的質(zhì)譜包括兩種:基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動(dòng)規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。蛋白質(zhì)組學(xué)包括蛋白與蛋白相互作用等。山東新型修飾蛋白組學(xué)質(zhì)譜鑒定定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析(Qu...
蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):技術(shù)發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,各有優(yōu)勢(shì)和的特點(diǎn),而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強(qiáng)調(diào)各種方法間的整合和互補(bǔ),以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)的不同特征。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要,這種交叉是新技術(shù)新方法的活水之源,特別是,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它大規(guī)??茖W(xué)如基因組學(xué),生物信息學(xué)等領(lǐng)域的交叉,構(gòu)成組學(xué)(omics)生物技術(shù)研究方法,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(xué)(SystemBiology)研究模式,將成為未來(lái)生命科學(xué)比較令人激動(dòng)的新前沿。蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個(gè)詞的...
蛋白質(zhì)組(Proteome)的概念指由一個(gè)基因組(genome),或一個(gè)細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)(Protein).蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別,它隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變.在轉(zhuǎn)錄時(shí),一個(gè)基因可以多種mRNA形式剪接,并且,同一蛋白可能以許多形式進(jìn)行翻譯后的修飾.故一個(gè)蛋白質(zhì)組不是一個(gè)基因組的直接產(chǎn)物,蛋白質(zhì)組中蛋白質(zhì)的數(shù)目有時(shí)可以超過(guò)基因組的數(shù)目.蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)處于早期“發(fā)育”狀態(tài),這個(gè)領(lǐng)域的**否認(rèn)它是單純的方法學(xué),就像基因組學(xué)一樣,不是一個(gè)封閉的、概念化的穩(wěn)定的知識(shí)體系,而是一個(gè)領(lǐng)域.蛋白質(zhì)組學(xué)集中于動(dòng)態(tài)描述基因調(diào)節(jié),對(duì)基因表達(dá)的蛋白質(zhì)水平進(jìn)行定...
蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):技術(shù)發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,各有優(yōu)勢(shì)和的特點(diǎn),而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強(qiáng)調(diào)各種方法間的整合和互補(bǔ),以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)的不同特征。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要,這種交叉是新技術(shù)新方法的活水之源,特別是,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它大規(guī)??茖W(xué)如基因組學(xué),生物信息學(xué)等領(lǐng)域的交叉,構(gòu)成組學(xué)(omics)生物技術(shù)研究方法,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(xué)(SystemBiology)研究模式,將成為未來(lái)生命科學(xué)比較令人激動(dòng)的新前沿。蛋白質(zhì)組意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”,即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。四...
非標(biāo)定量法(Label-free)是通過(guò)比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度,分析不同來(lái)源樣品蛋白的數(shù)量變化,認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來(lái),從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。按照其原理主要分為兩種,第1種spectrumcounts類的非標(biāo)記方法,發(fā)展比較早,已經(jīng)形成多種定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ),各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標(biāo)記定量的原理是以MS1為基礎(chǔ),計(jì)算每個(gè)肽段的信號(hào)強(qiáng)度在LC-MS上的積分。蛋白質(zhì)組意指“一種基因...
蛋白質(zhì)組學(xué)是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來(lái)巨大的利益,是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。蛋白質(zhì)是生命存在和運(yùn)動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ),是細(xì)胞增殖、分化、衰老和凋亡等重大生命活動(dòng)的執(zhí)行者,亦是基因功能活動(dòng)的執(zhí)行者,是生命現(xiàn)象復(fù)雜性和多變性的直接體現(xiàn)者。蛋白質(zhì)組研究是為了識(shí)別及鑒定一個(gè)細(xì)胞或組織所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)以及它們的表達(dá)模式,是對(duì)基因組研究的重要補(bǔ)充,是對(duì)生物體在蛋白質(zhì)水平上定量、動(dòng)態(tài)、整體性的研究。這類研究有助于了解蛋白的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞的功能、生命的本質(zhì)及活動(dòng)規(guī)律,為疾病的診斷、診療、疫苗及新藥開(kāi)發(fā)...
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(gè)(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量,可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)是多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似,可研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用比較普遍的技術(shù)。廣州定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用我國(guó)科學(xué)家已經(jīng)在重大疾病如...
蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):1、基礎(chǔ)研究方面:近兩年來(lái)蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域,如細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等。在研究對(duì)象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動(dòng)物等范圍,涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。在未來(lái)的發(fā)展中,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究領(lǐng)域?qū)⒏悠毡椤?、應(yīng)用研究方面:蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一。在對(duì)早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術(shù)也有十分誘人的前景,目前國(guó)際上許多大型藥物公司正投入大量的人力和物力進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)方面的應(yīng)用性研究。蛋白質(zhì)組學(xué)包括蛋白與蛋白相互作用等。湖北常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析蛋白...
定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:特點(diǎn):(1)不同樣本標(biāo)記之后混樣,統(tǒng)一處理上機(jī),減少了分別上機(jī)造成的實(shí)驗(yàn)誤差,并利用同位素標(biāo)簽的豐度來(lái)檢測(cè),定量更準(zhǔn)確,重復(fù)性更好;(2)由于需要標(biāo)記試劑標(biāo)記,因此成本相對(duì)較高;(3)通量高,在一次實(shí)驗(yàn)中比較多可同時(shí)比較8個(gè)樣品;(4)利用基于同一個(gè)參考樣品的辦法,可以進(jìn)行多于8個(gè)樣品的定量比較;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:Label-Free定量,即非標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué),不需要對(duì)比較樣本做特定標(biāo)記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)便可得到樣品間蛋白表達(dá)量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時(shí)...
蛋白組學(xué)樣本寄送前是否需要精確計(jì)數(shù)或是稱量?不同樣本寄送會(huì)有不同的送樣要求,按照收集方法提供可以保證實(shí)驗(yàn)用量充足。不需要精確計(jì)數(shù)或是稱量,項(xiàng)目開(kāi)展前會(huì)進(jìn)行蛋白濃度的測(cè)定,后續(xù)也是不同樣本等蛋白量處理、上機(jī)檢測(cè),但是要保證每個(gè)樣本的寄樣量達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。常規(guī)定量蛋白組實(shí)驗(yàn)的主要步驟有哪些,數(shù)據(jù)分析內(nèi)容包含哪些?實(shí)驗(yàn)步驟:首先獲得生物學(xué)樣本,然后進(jìn)行蛋白提取,定量,SDS-PAGE跑膠質(zhì)控,還原烷基化,酶解,獲得肽段,(標(biāo)記+分組分),上機(jī)檢測(cè),搜庫(kù)軟件搜庫(kù),數(shù)據(jù)分析;數(shù)據(jù)分析:主要分為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)分析、?級(jí)數(shù)據(jù)分析和個(gè)性化數(shù)據(jù)分析三個(gè)部分?;A(chǔ)分析主要包括差異表達(dá)蛋白篩選、層次聚類分析分析、COG注釋...
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容,通過(guò)對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達(dá)情況。近年來(lái),隨著非凝膠技術(shù)的發(fā)展,蛋白質(zhì)組學(xué)(“Shotgun”proteomics)技術(shù),特別是多維蛋白質(zhì)鑒定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成為研究復(fù)雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)和定性和定量分析的強(qiáng)有力工具。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用比較普遍的技術(shù)。浙江蛋白質(zhì)定量...
蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):技術(shù)發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,各有優(yōu)勢(shì)和的特點(diǎn),而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強(qiáng)調(diào)各種方法間的整合和互補(bǔ),以適應(yīng)不同蛋白質(zhì)的不同特征。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要,這種交叉是新技術(shù)新方法的活水之源,特別是,蛋白質(zhì)組學(xué)與其它大規(guī)模科學(xué)如基因組學(xué),生物信息學(xué)等領(lǐng)域的交叉,構(gòu)成組學(xué)(omics)生物技術(shù)研究方法,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(xué)(SystemBiology)研究模式,將成為未來(lái)生命科學(xué)比較令人激動(dòng)的新前沿。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有生物質(zhì)譜。貴州蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):電噴霧質(zhì)譜:ESI-MS是利用...
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(labelfree)定量策略,標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記和體外標(biāo)記兩種。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動(dòng)態(tài)變化對(duì)各種生命過(guò)程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中,常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達(dá)異常。定量蛋白質(zhì)組學(xué)就是把一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進(jìn)行精確的定量和鑒定。非標(biāo)記(labelfree)的定量蛋白組學(xué)技術(shù),Labelfree定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無(wú)需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段...
蛋白質(zhì)組學(xué),指對(duì)某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動(dòng)的分子網(wǎng)絡(luò)。研究的內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征、蛋白質(zhì)的豐度、蛋白質(zhì)活性、蛋白質(zhì)的修飾、亞細(xì)胞定位和三維結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對(duì)蛋白質(zhì)的高階復(fù)合物結(jié)構(gòu)。質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展為這些研究提供了有力的技術(shù)支撐,使得許多有實(shí)際應(yīng)用的蛋白質(zhì)組功能研究成為可能,包括翻譯后修飾的整體分析,蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的重建和模式生物蛋白表達(dá)譜的定量研究;在臨床醫(yī)學(xué)和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中也越來(lái)越多地應(yīng)用到蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)。蛋白質(zhì)組學(xué)由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過(guò)程的整體...
定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析(QuantitativeProteomics)是對(duì)一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜混合體系內(nèi)所有蛋白質(zhì)進(jìn)行精確鑒定和定量??捎糜诤Y選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達(dá)蛋白,結(jié)合生物信息學(xué)揭示細(xì)胞生理病理等功能,同時(shí)也可對(duì)某些關(guān)鍵蛋白進(jìn)行定性和定量分析。目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)常見(jiàn)標(biāo)記(Label)和非標(biāo)記的(LabelFree)定量策略。定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)常見(jiàn)的幾類主要包括:LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學(xué)分析、SILAC/Dimethyl標(biāo)記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學(xué)、TMT/iTRAQ/m...
LabelFree(非標(biāo)記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)):應(yīng)用:1.需要快速在大量樣本中找到差異表達(dá)的蛋白組合。2.需要在較短時(shí)間以較低成本得到具有提示意義的蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)。3.需要檢測(cè)的樣品蛋白含量低。4.需要檢測(cè)相互作用蛋白。技術(shù)特點(diǎn):1.對(duì)質(zhì)譜儀器設(shè)備要求較高,色譜和質(zhì)譜需要同時(shí)有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。2.需要有特殊的定量分析軟件。3.對(duì)樣品中蛋白質(zhì)總量要求較低,實(shí)驗(yàn)周期短,實(shí)驗(yàn)費(fèi)用低。4.不需要額外并且昂貴的標(biāo)記試劑,排除了標(biāo)記過(guò)程帶入實(shí)驗(yàn)誤差的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)也不必考慮標(biāo)記效率的問(wèn)題。蛋白質(zhì)組的研究能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑。江蘇TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格蛋白質(zhì)...
蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?具體而言,蛋白質(zhì)組學(xué)在此類應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。作為檢測(cè)手段的蛋白質(zhì)組學(xué):事實(shí)上,在當(dāng)前的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中,蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)有非常多的應(yīng)用。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來(lái)看),就是對(duì)蛋白質(zhì)的定性定量分析。生物醫(yī)學(xué)和臨床診斷中,需要大量表征一種或多種蛋白質(zhì)的含量、氨基酸序列、翻譯后修飾等信息。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進(jìn)行相關(guān)研究和日常工作。很容易發(fā)現(xiàn),當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)的臨床應(yīng)用更多地集中在第二類。第1類的應(yīng)用更接近于生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,目前還沒(méi)有和...
蛋白質(zhì)組學(xué)是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來(lái)巨大的利益,是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。蛋白質(zhì)是生命存在和運(yùn)動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ),是細(xì)胞增殖、分化、衰老和凋亡等重大生命活動(dòng)的執(zhí)行者,亦是基因功能活動(dòng)的執(zhí)行者,是生命現(xiàn)象復(fù)雜性和多變性的直接體現(xiàn)者。蛋白質(zhì)組研究是為了識(shí)別及鑒定一個(gè)細(xì)胞或組織所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)以及它們的表達(dá)模式,是對(duì)基因組研究的重要補(bǔ)充,是對(duì)生物體在蛋白質(zhì)水平上定量、動(dòng)態(tài)、整體性的研究。這類研究有助于了解蛋白的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞的功能、生命的本質(zhì)及活動(dòng)規(guī)律,為疾病的診斷、診療、疫苗及新藥開(kāi)發(fā)...
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):飛行時(shí)間質(zhì)譜:MALDI的基本原理是將分析物分散在基質(zhì)分子(尼古丁酸及其同系物)中并形成晶體,當(dāng)用激光(337nm的氮激光)照射晶體時(shí),基質(zhì)分子吸收激光能量,樣品解吸附,基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使樣品分子電離。它從固相標(biāo)本中產(chǎn)生離子,并在飛行管中測(cè)定其分子量,MALDI-TOF-MS一般用于肽質(zhì)量指紋圖譜,非常快速(每次分析只需3~5min),靈敏(達(dá)到fmol水平),可以精確測(cè)量肽段質(zhì)量,但是如果在分析前不修飾肽段,MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù)。貴州Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)錢蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)...
蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展趨勢(shì):1、基礎(chǔ)研究方面:近兩年來(lái)蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域,如細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等。在研究對(duì)象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動(dòng)物等范圍,涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。在未來(lái)的發(fā)展中,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究領(lǐng)域?qū)⒏悠毡椤?、應(yīng)用研究方面:蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一。在對(duì)早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術(shù)也有十分誘人的前景,目前國(guó)際上許多大型藥物公司正投入大量的人力和物力進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)方面的應(yīng)用性研究。蛋白組學(xué)樣本寄送前是否需要精確計(jì)數(shù)或是稱量?廣東外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)...