采用基因編輯技術(shù)制備的細(xì)胞產(chǎn)品。對于采用基因編輯技術(shù)制備的基因修飾細(xì)胞產(chǎn)品，應(yīng)進(jìn)行體外在靶和脫靶活性評估，以確認(rèn)修飾酶或向?qū)NA對靶基因序列的特異性。在評估基因編輯的脫靶風(fēng)險時，應(yīng)說明所選擇的評價策略的合理性和敏感性。雖然采用計算機(jī)分析預(yù)測基因編輯的潛在脫靶位點，并對潛在脫靶位點進(jìn)行深度測序分析，可用于評估基因編輯的脫靶風(fēng)險；但選擇的評價策略仍應(yīng)包含體外全基因組測序比對，以證明潛在脫靶位點未出現(xiàn)脫靶。此外，在評估脫靶活性時，還應(yīng)評估種屬特異性的差異、細(xì)胞病理生理狀態(tài)的差異或細(xì)胞類型的差異對非臨床數(shù)據(jù)預(yù)測性的影響。必要時，還應(yīng)分析基因編輯對細(xì)胞表型和生理功能的潛在影響。針對已經(jīng)獲得的有切割能力的sgRNA，需要進(jìn)一步明確其體內(nèi)脫靶效應(yīng)。深圳off-target脫靶檢測安全性評價

CAR或TCR修飾的免疫細(xì)胞對于嵌合抗原受體（Chimericantigenreceptor，CAR）或T細(xì)胞受體（Tcellreceptor，TCR）修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)盡可能采用多種方法評估其靶點相關(guān)毒性和脫靶毒性風(fēng)險。對于靶點相關(guān)毒性，應(yīng)采用體外方法深入分析靶點在人體qiguan、組織和細(xì)胞中的表達(dá)分布情況，基因表達(dá)分析庫和文獻(xiàn)調(diào)研也可能會有助于闡明靶點在不同病理生理狀態(tài)下的表達(dá)是否存在差異。應(yīng)采用表達(dá)和不表達(dá)靶抗原的細(xì)胞作為靶細(xì)胞進(jìn)行體外試驗，確認(rèn)CAR或TCR修飾的免疫細(xì)胞可特異性的識別和殺傷靶細(xì)胞。對于CAR修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)采用多種體外方法評估其胞外抗原識別區(qū)的脫靶風(fēng)險。深圳crispr/cas9脫靶檢測安評內(nèi)基因編輯技術(shù)可能造成的脫靶效應(yīng),建立了一種被命名為GOTI。

但是由于CHIP-seq實驗本身的難度較高，DISCOVER-seq這類方法的接受度并不高。3. 其他特殊方法CRISPR技術(shù)經(jīng)過這么多年的發(fā)展，其應(yīng)用已經(jīng)不局限于造成DNA雙鏈斷裂，一些不要切割DNA雙鏈的CRISPR衍生技術(shù)（如堿基編輯、先導(dǎo)編輯和CRISPRi/a），可以在不引發(fā)隨機(jī)突變的情況下，對基因組進(jìn)行精細(xì)編輯或者調(diào)控。這些技術(shù)所使用nCas9或dCas9只結(jié)合或者切割雙鏈中的一條鏈，之前的脫靶檢測方法都不能直接適用。這些CRISPR衍生技術(shù)中，CRISPR產(chǎn)生的脫靶可以被細(xì)分為兩個部分，其一是Cas9/sgRNA結(jié)合DNA導(dǎo)致的脫靶，這部分信息使用同樣序列的sgRNA進(jìn)行野生型Cas9脫靶位點檢測能夠間接得到

近幾年，細(xì)胞和基因zhiliao（cell & gene therapy，CGT）領(lǐng)域發(fā)展迅猛，在多個方向取得了重大突破，以anti-CD19和BCMA為代的多種CAR-T免疫細(xì)胞療法攻克了一部分血液瘤，多種AAV療法也給一些難以成藥的罕見病提供了有效的zhiliao方案。另一方面，基于CRISPR基因編輯技術(shù)的眾多基因療法也進(jìn)展迅速，較早體外基因編輯療法較快今年年底能夠上市（CRISPR Therapeutics CTX001），體內(nèi)基因編輯療法取得了不錯的臨床數(shù)據(jù)（Intellia Therapeutics NTLA-2001），使用CRISPR技術(shù)制造的通用型CAR-T療法也是免疫細(xì)胞療法發(fā)展的一大趨勢（Caribou Biosciences CB-010）。種子基因脫靶檢測機(jī)構(gòu)推薦唯可。

GUIDE-Seq脫靶評估技術(shù)的優(yōu)勢分析鼓潤致力于基因組編輯工具脫靶的分析檢測工作，為篩選、優(yōu)化基因組編輯工具的保真性提供標(biāo)準(zhǔn)化的分析。我們脫靶分析具有如下優(yōu)勢：實用性強(qiáng)：能反映CRISPR在真核細(xì)胞中進(jìn)行基因編輯的在靶與脫靶情況，以進(jìn)行安全性和有效性評價；檢測通量高：一次能檢測多個樣本的在靶與脫靶情況，并通過優(yōu)化的標(biāo)簽設(shè)計，降低實際的測序reads數(shù)量；準(zhǔn)確性高：絕大部分檢測結(jié)果可被驗證；靈敏度高：能夠高效檢測出低頻脫靶位點，檢測低至0.1%的脫靶突變；實驗難度低：操作過程簡單易行細(xì)胞適應(yīng)性強(qiáng)。脫靶檢測guide-sequence，推薦唯可生物，實驗實力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。南京基因編輯技術(shù)脫靶檢測服務(wù)

種子脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。深圳off-target脫靶檢測安全性評價

國內(nèi)外基因zhiliao產(chǎn)品開展的非臨床研究、長期隨訪獲得的臨床經(jīng)驗以及基因組整合位點分析方法的明顯改進(jìn)，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao載體相關(guān)風(fēng)險。通常認(rèn)為，很多能夠介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞核的載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、轉(zhuǎn)座子元件和基因編輯產(chǎn)品等）有基因組整合潛力，需要通過長期隨訪觀察遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險；根據(jù)目前的認(rèn)識和研究數(shù)據(jù)，質(zhì)粒、痘病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒（AAV）等載體的基因zhiliao產(chǎn)品整合風(fēng)險較低，國際上開展的臨床試驗中也表現(xiàn)出較低的遲發(fā)性不良反應(yīng)風(fēng)險。當(dāng)載體或基因zhiliao產(chǎn)品原有的風(fēng)險特征增加時，例如經(jīng)過修飾以攜帶基因組編輯成分的質(zhì)?；蚋淖兘oyaofang式以提高整合能力等，需要提高對長期隨訪觀察的要求；反之，也可以對目前認(rèn)為存在遲發(fā)風(fēng)險的基因zhiliao載體進(jìn)行修飾，以降低這些風(fēng)險。深圳off-target脫靶檢測安全性評價