先導編輯器：CBE和ABE組合使用可以有效地進行4種堿基轉換（C→T, G→A, A→G, T→C），而無需產生DSB，然而除了這4種堿基轉換，對另外8種堿基轉換（C→A, C→G, G→C, G→T, A→C, A→T, T→A, T→G）以及堿基的插入和缺失，依然缺乏有效的研究工具。先導編輯器（Prime Editor, PE），PE在不依賴DSB和供體DNA的條件下便可有效實現(xiàn)所有12種堿基轉換，此外還能有效實現(xiàn)多堿基的精細插入（較多可插入44bp）和刪除（較多刪除80bp）。> 抗CRISPR蛋白?？笴RISPR（Acr）蛋白是天然的CRISPR/Cas系統(tǒng)抑制劑，由各種可移動遺傳元件（MGEs）編碼，在不同階段抑制CRISPR-Cas的免疫功能。已經發(fā)現(xiàn)了多達45個Acr蛋白，其中 "AcrIIA4 "有可能保護細胞免受編輯。Shin和他的同事發(fā)現(xiàn)，通過調整AcrIIA4或Cas9加入實驗的時間，AcrIIA4將脫靶修飾減少了4倍，而沒有減少靶向效應。脫靶檢測實驗室，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結果準確率高。南通脫靶檢測

CRISPR基因編輯zhiliao發(fā)展如火如荼，但也有不少人對基因zhiliao的安全性提出擔憂，由于CRISPR技術是直接改變基因組DNA，其中任何的改變都會被長久保留下來，所以CRISPR對于DNA序列的任何改變都需要嚴謹?shù)陌踩u估。根據(jù)目前已經公開的FDA關于基因zhiliao的指導文件，對于基因zhiliao安全性的評估可以簡單總結為兩個方面：由于目前大部分CRISPR基因編輯zhiliao方案是基于CRISPR引起的DNA雙鏈斷裂和隨機突變進行基因敲除，所以一類風險主要是指靶位點的隨機突變引發(fā)的安全風險，如果出現(xiàn)大片段丟失、染色體重排等異常變化，都存在巨大的安全隱患。南通脫靶檢測挑選前面的潛在脫靶位點，通過PCR測序驗證是否脫靶。

如果基因zhiliao產品通過全身給xingfang式遞送，長期隨訪中的安全性監(jiān)測不僅包括靶qiguan或靶組織的脫靶活性，而且還應包括可能發(fā)生在其他組織和qiguan中的脫靶活性?；蚪M整合性或者脫靶活性的分析通常需采用有創(chuàng)性12檢測方法取得樣本，實施時還需要考慮技術和倫理上的可行性，例如靶向視網膜或肝臟等組織的基因zhiliao產品，可能難以對靶細胞采樣，這種情況下可能需要通過密切的臨床隨訪等方式間接評估風險；同時，選擇易于采樣的替代細胞也可能提供關于相關信息，例如靶向骨髓造血干細胞的基因zhiliao產品，可以通過采集外周血細胞或富集外周血干細胞進行觀察。

2022年2月下旬，在醫(yī)麥客舉辦的年度盛會——“蓄力前行，助航新生——2021 CSGCT基因與細胞zhiliao醫(yī)學峰會”期間，唯可生物創(chuàng)始人兼CEO-吳寧博士分享了唯可生物在基因zhiliao賽道針對安全性展開的技術服務，讓在場行業(yè)大咖和觀眾真正領會到ISA(integration site analysis，整合位點插入分析)領域國際金標準技術的優(yōu)勢，以及基因編輯定量脫靶檢測、載體拷貝數(shù)檢測、載體質量控制等多項檢測技術的行業(yè)意義。吳寧博士畢業(yè)于德國海德堡大學，德國國家aizheng研究中心(DKFZ)，并于2021年3月同幾位合伙人聯(lián)合創(chuàng)立了上海唯可生物科技有限公司。其創(chuàng)始團隊擁有的檢測技術包括源于DKFZ，Manfred Schmidt團隊的LAM-PCR(linear amplification-mediated Polymerase Chain Reaction，線性擴增陽離子介導的聚合酶鏈反應)，LTA-PCR(Ligation-mediated target amplification Polymerase Chain Reaction，連接介導的目標擴增聚合酶鏈反應)和TES(Target enrichment sequencing，靶向富集測序)體系，并基于此形成的多項全球lingxian的基因zhiliao安全性檢測技術。育種脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結果準確率高。

細胞外檢測方法：細胞外檢測方法較為直接，將基因組提純后進行CRISPR體外切割實驗，再捕獲發(fā)生脫靶切割的位點即可。1) Digenome-seqDigenome-seq是較早提出的一類細胞外脫靶位點檢測方法，提純的基因組DNA被Cas9/sgRNA切割后，再經過標準的全基因組測序流程獲得測序數(shù)據(jù)，之后需要較為復雜的生物信息學分析才能夠獲得CRISPR切割位點的信息?？傮w來講，這種方法測序成本較高，并且檢測靈敏度也有限。2)SITE-seq為了有效檢測到低頻脫靶位點，一般需要在建庫時定向捕獲CRISPR切割位點。SITE-seq就是這樣一種測序方法，提純的基因組DNA經過Cas9/sgRNA切割后，在切割位點末端連接帶Biotin的接頭；再隨機打斷基因組，在另一端連接第二個接頭；經過鏈霉親和素磁珠純化，只有一輪被Cas9切割的DNA才能夠被純化并測序，實現(xiàn)了CRISPR切割位點的富集。該方法雖然提高了脫靶位點的檢測靈敏度，但有著較高的實驗要求，每次需要投入大量的基因組DNA，并且無法區(qū)分提純基因組DNA時發(fā)生的隨機斷裂和Cas9的切割，導致產出較為明顯的背景信號。同時，由于一輪Biotin接頭只會接在Cas9切割位點的一側，導致測序結果里只能看到脫靶位點一側的序列。種子基因脫靶檢測機構推薦唯可。無錫種子脫靶檢測企業(yè)

根據(jù)選擇的sgRNA，通過生物信息學方法，對sgRNA進行脫靶分析。南通脫靶檢測

Guide-seq原理圖，Discover-seq細胞內的脫靶切割一般無法直接捕獲，除了Guide-seq這種連接dsODN來間接記錄脫靶位點的方法外，研究者們還想出一種蛋白介導的方法Discover-seq。由于DNA雙鏈斷裂后細胞會啟動DNA修復機制，大量蛋白參與到斷裂處的修復，所以研究者就對相關蛋白進行篩選，找到其中MRE11結合DNA的位點與DNA雙鏈斷裂的相關性比較好。DISCOVER-seq便是通過MRE11的CHIP-seq（染色質免疫共沉淀）來反映CRISPR的脫靶位點。。。。南通脫靶檢測