慢病毒整合事件要素及檢測(cè)方法要求：對(duì)于食藥監(jiān)局指導(dǎo)性文件和既往研究內(nèi)容，我們不難發(fā)現(xiàn)對(duì)于慢病毒整合檢測(cè)所謂整合事件至少包含三個(gè)要素：整合位置；整合方向；特定整合位置和整合方向的juedui克隆數(shù)目；因此檢測(cè)在定性和定量性能方面都有要求，檢測(cè)方法需要結(jié)合臨床樣本進(jìn)行分析性能進(jìn)行系統(tǒng)驗(yàn)證。慢病毒整合位點(diǎn)檢測(cè)方法，目前檢測(cè)慢病毒整合位點(diǎn)的主要平臺(tái)為高深度測(cè)序（NGS)。而目前較為成熟已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)及臨床研究的整合位點(diǎn)富集建庫方法為機(jī)械片段化及依賴于接頭的擴(kuò)增子建庫(LM-PCR,如INSPIIRED),已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)CART19臨床項(xiàng)目的安全性評(píng)估及與CAR-T細(xì)胞增值相關(guān)的回顧yao效學(xué)分析。插入位點(diǎn)整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。南通CAR-T整合位點(diǎn)方法

全基因組測(cè)序是對(duì)重組細(xì)胞的基因組DNA進(jìn)行深度測(cè)序，技術(shù)成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結(jié)合二代測(cè)序的檢測(cè)方法。LM-PCR全稱連接介導(dǎo)的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進(jìn)行隨機(jī)打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區(qū)域的嵌合序列。此擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行二代測(cè)序即可以分析確定載體在宿主基因組上的整合位點(diǎn)。LM-PCR與高通量測(cè)序技術(shù)相結(jié)合后，有了更為豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。比如，識(shí)別整合載體（慢病毒載體，轉(zhuǎn)座子）的整合位點(diǎn)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于基因zhiliao研究基因修飾細(xì)胞的克隆組成，或者通過研究整合事件評(píng)估新載體系統(tǒng)的生物安全性。北京crispr/cas9整合位點(diǎn)CRO載體整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

例如，對(duì)于經(jīng)過基因修飾的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品如CAR-T，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)和流式細(xì)胞術(shù)（Flowcytometry）進(jìn)行PK分析，分別通過測(cè)定外源基因拷貝和CAR+細(xì)胞數(shù)量的變化，有助于互相驗(yàn)證檢測(cè)方法的可靠性，可以更duomian的分析產(chǎn)品在體內(nèi)的擴(kuò)增和存活情況。對(duì)于大多數(shù)免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，可以通過細(xì)胞和/或體液免疫應(yīng)答分析藥效學(xué)活性。有多個(gè)特異性靶點(diǎn)的zhiliao產(chǎn)品，應(yīng)分析其對(duì)每個(gè)靶點(diǎn)的作用活性。如果細(xì)胞經(jīng)體外基因修飾，在體內(nèi)分泌特定蛋白、多肽或其它活性成分，或敲除了特定基因的表達(dá)，也需要進(jìn)行針對(duì)性的藥效學(xué)分析，如檢測(cè)特定蛋白的活性、持續(xù)時(shí)間和變化情況等。

遲發(fā)性不良反應(yīng)相關(guān)的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素在評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)因素時(shí)，申請(qǐng)人應(yīng)考慮基因zhiliao產(chǎn)品的特性，同時(shí)參考該產(chǎn)品的非臨床和臨床數(shù)據(jù)以及類似產(chǎn)品的已知數(shù)據(jù)?；騴hiliao產(chǎn)品的非臨床研究旨在為臨床研究提供支持性信息和關(guān)鍵安全性特征參數(shù)，如機(jī)體中的生物分布和持久性、整合/修飾宿主基因組、潛伏再jihuo以及潛在免疫原性等。對(duì)于新型基因zhiliao產(chǎn)品，可參考數(shù)據(jù)有限，申請(qǐng)人應(yīng)盡可能在非臨床研究中獲得用于評(píng)估遲發(fā)性不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)的數(shù)據(jù)。慢病毒插入位點(diǎn)檢測(cè)淺析。

當(dāng)產(chǎn)品預(yù)期的活性成分可以明確時(shí)，申請(qǐng)人往往選擇較能代預(yù)期活性的特定細(xì)胞亞群來描述產(chǎn)品劑量，例如，很多導(dǎo)入外源基因的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品中的載體陽性細(xì)胞數(shù)。在這種情況下，申請(qǐng)人還應(yīng)描述載體陽性細(xì)胞數(shù)與其它細(xì)胞成分的比例，并分析轉(zhuǎn)導(dǎo)效率對(duì)患者安全性及有效性的影響。劑量遞增，在惡性liu患者中開展早期探索性臨床試驗(yàn)時(shí)，申請(qǐng)人經(jīng)常選擇3+3、改良毒性概率區(qū)間（mTPI）和貝葉斯比較好區(qū)間（BOIN）等設(shè)計(jì)。對(duì)于shou次開展人體臨床研究的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，在選擇劑量探索試驗(yàn)每個(gè)劑量組的樣本量以及組間劑量增幅時(shí)，還應(yīng)考慮非臨床研究及類似產(chǎn)品的臨床經(jīng)驗(yàn)中劑量變化對(duì)受試者安全性和有效性的影響。傳統(tǒng)PCR技術(shù)分析整合位點(diǎn)依賴限制性內(nèi)切酶酶切,存在一定偏好性；無錫LV整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

迎細(xì)胞基因浪潮,整合位點(diǎn)分析方法來助力。南通CAR-T整合位點(diǎn)方法

生殖毒性基因zhiliao產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)受試物的產(chǎn)品類型、作用機(jī)制、一般毒理發(fā)現(xiàn)、生物分布特征以及患者人群來評(píng)估潛在的生殖/發(fā)育毒性風(fēng)險(xiǎn)。生殖毒性試驗(yàn)的研究策略和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估可參考ICHS5（R3）的建議和ICHM3（R2）、S6及S9中的相關(guān)內(nèi)容。通常需要開展胚胎-胎仔發(fā)育毒性和圍產(chǎn)期毒性研究，除非有基于具體產(chǎn)品類型的特殊考慮并具有科學(xué)合理性。如果基因zhiliao產(chǎn)品擬用于有生育可能或妊娠人群，應(yīng)研究產(chǎn)品對(duì)胎兒的影響（例如細(xì)胞因子局部生成后通過胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)），開展胚胎-胎仔發(fā)育和圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)。如果在一般毒理學(xué)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有潛在的生殖qiguan毒性反應(yīng)，應(yīng)開展生育力和早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)。南通CAR-T整合位點(diǎn)方法