慢病毒整合事件要素及檢測(cè)方法要求：對(duì)于食藥監(jiān)局指導(dǎo)性文件和既往研究?jī)?nèi)容，我們不難發(fā)現(xiàn)對(duì)于慢病毒整合檢測(cè)所謂整合事件至少包含三個(gè)要素：整合位置；整合方向；特定整合位置和整合方向的juedui克隆數(shù)目；因此檢測(cè)在定性和定量性能方面都有要求，檢測(cè)方法需要結(jié)合臨床樣本進(jìn)行分析性能進(jìn)行系統(tǒng)驗(yàn)證。慢病毒整合位點(diǎn)檢測(cè)方法，目前檢測(cè)慢病毒整合位點(diǎn)的主要平臺(tái)為高深度測(cè)序（NGS)。而目前較為成熟已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)及臨床研究的整合位點(diǎn)富集建庫(kù)方法為機(jī)械片段化及依賴(lài)于接頭的擴(kuò)增子建庫(kù)(LM-PCR,如INSPIIRED),已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)CART19臨床項(xiàng)目的安全性評(píng)估及與CAR-T細(xì)胞增值相關(guān)的回顧yao效學(xué)分析。慢病毒整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專(zhuān)業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。武漢整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

當(dāng)載體或基因zhiliao產(chǎn)品原有的風(fēng)險(xiǎn)特征增加時(shí)，例如經(jīng)過(guò)修飾以攜帶基因組編輯成分的質(zhì)?；蚋淖兘oyaofang式以提高整合能力等，需要提高對(duì)長(zhǎng)期隨訪觀察的要求；反之，也可以對(duì)目前認(rèn)為存在遲發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的基因zhiliao載體進(jìn)行修飾，以降低這些風(fēng)險(xiǎn)。長(zhǎng)期表達(dá)，與其他產(chǎn)品相比，部分基因zhiliao產(chǎn)品的明顯特征是可以在患者靶細(xì)胞或基因修飾細(xì)胞中持續(xù)存在并編碼表達(dá)作用因子（功能性蛋白或基因表達(dá)調(diào)節(jié)元件），并通過(guò)長(zhǎng)久或長(zhǎng)期改變靶細(xì)胞或組織的功能來(lái)達(dá)到zhiliao效果。同時(shí)，由于基因zhiliao編碼的作用因子在體內(nèi)的長(zhǎng)期暴露或表達(dá)異常，可能產(chǎn)生與其功能相關(guān)的長(zhǎng)期安全性風(fēng)險(xiǎn)，如細(xì)胞生長(zhǎng)失控和惡性liu形成、自身免疫反應(yīng)或其他無(wú)法預(yù)測(cè)的遲發(fā)性不良反應(yīng)。武漢慢病毒載體整合位點(diǎn)評(píng)估從細(xì)胞游離DNA中檢測(cè)載體整合位點(diǎn)。

長(zhǎng)期隨訪獲得的臨床經(jīng)驗(yàn)以及基因組整合位點(diǎn)分析方法的明顯改進(jìn)，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao載體相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。很多能夠介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞核的載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、轉(zhuǎn)座子元件和基因編輯產(chǎn)品等）有基因組整合潛力，需要通過(guò)長(zhǎng)期隨訪觀察遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)；基因組整合性或者脫靶活性的分析通常需采用有創(chuàng)性12檢測(cè)方法取得樣本，實(shí)施時(shí)還需要考慮技術(shù)和倫理上的可行性，例如靶向視網(wǎng)膜或肝臟等組織的基因zhiliao產(chǎn)品，可能難以對(duì)靶細(xì)胞采樣，這種情況下可能需要通過(guò)密切的臨床隨訪等方式間接評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)，選擇易于采樣的替代細(xì)胞也可能提供關(guān)于相關(guān)信息，例如靶向骨髓造血干細(xì)胞的基因zhiliao產(chǎn)品，可以通過(guò)采集外周血細(xì)胞或富集外周血干細(xì)胞進(jìn)行觀察。

單克隆擴(kuò)增=變？相反的，可能是療效持久的正面信號(hào)。那么在臨床過(guò)程中發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性單克隆慢病毒整合增殖就一定高度懷疑二次成瘤嗎？其實(shí)CAR-Tzhiliao到目前為止還沒(méi)有導(dǎo)致T細(xì)胞惡性liu的報(bào)告。一項(xiàng)調(diào)查年到2017年CAR-CD19臨床I/II期ALL、NHL、CLL病人的回顧數(shù)據(jù)顯示，研究隊(duì)列中NHL患者有11%的繼發(fā)性惡性liu發(fā)生率，與NHL常規(guī)zhiliao后繼發(fā)性惡性liu的預(yù)期發(fā)生率相似(4–10%)。單克隆高度擴(kuò)增可能維持藥物持久性而非變，一項(xiàng)CAR-CD19在CLL中的臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，盡管CAR-CD19對(duì)CLL的臨床效果不甚理想，但有一例病人的zhiliao效果非常好。整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專(zhuān)業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

對(duì)確證性臨床試驗(yàn)的療效和安全性要求:“繼續(xù)監(jiān)測(cè)安全性風(fēng)險(xiǎn)，分析重要的已知和潛在的風(fēng)險(xiǎn)信息，包括遲發(fā)性不良事件(如致瘤性)的發(fā)生率、 嚴(yán)重性和危險(xiǎn)因素等，并有必要采取措施使風(fēng)險(xiǎn)較小化。" 2021年2月發(fā)布的《基因修飾細(xì)胞zhiliao 產(chǎn)品非臨床研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》則明確將"插入突變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估"作為非臨床安全性研究的內(nèi)容，并詳細(xì)規(guī)定關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因素的評(píng)估要點(diǎn)?？梢?jiàn)慢病毒載體整合位點(diǎn)檢測(cè)已經(jīng)成為細(xì)胞zhiliao 產(chǎn)品IND評(píng)審及臨床試驗(yàn)安全性評(píng)估的必檢內(nèi)容。慢病毒載體在CAR-T細(xì)胞中的整合位點(diǎn)分析方法。江蘇病毒整合位點(diǎn)政策

迎細(xì)胞基因浪潮,整合位點(diǎn)分析方法來(lái)助力。武漢整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

CAR-T慢病毒載體整合的潛在安全性隱患包括CAR-Tzhiliao在內(nèi)的基因編輯性細(xì)胞zhiliao方法，采用慢病毒整合性載體將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，某些插入位置可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。因載體整合導(dǎo)致致瘤性基因變異及新發(fā)細(xì)胞變稱(chēng)為二次成瘤。在持續(xù)性細(xì)胞zhiliao過(guò)程中，這種潛在的成瘤性不良反應(yīng)的發(fā)生時(shí)間往往會(huì)有明顯的滯后性且很難預(yù)測(cè)。因此CAR-Tzhiliao需要評(píng)估潛在的插入突變風(fēng)險(xiǎn)和致性風(fēng)險(xiǎn)。武漢整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室