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空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)包含兩種芯片,分別為組織優(yōu)化芯片(Tissue Optimization)和基因表達(dá)芯片(Library Preparation)。組織優(yōu)化芯片用來摸索組織透化的比較好時(shí)間,基因表達(dá)芯片用來進(jìn)行正式樣本的空間轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)。其中基因表達(dá)芯片上有 4 個(gè)捕獲區(qū)域,每個(gè)區(qū)域大小為 6.5mm×6.5mm,每個(gè)捕獲區(qū)域中有 5000 個(gè)帶有特異地址序列的探針簇,稱為 barcoded spots,每個(gè) spot 直徑為 55um,包含數(shù)百萬個(gè)用于捕獲的 oligo 探針序列,相鄰兩個(gè) spot 的中心距離為 100um。探針序列的結(jié)構(gòu)為:測(cè)序引物結(jié)合序列,16nt 的位置序列,12nt 的 UMI 序列以及 30nt 的 oligo-dT 序列。研究通過對(duì) ALS 小鼠疾病進(jìn)程(癥狀前、發(fā)病、癥狀期和終末期)的脊髓組織進(jìn)行空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。海南空間轉(zhuǎn)錄組做什么
美國(guó)腦計(jì)劃啟動(dòng)的 BICCN 項(xiàng)目,該項(xiàng)目將整合不同類型細(xì)胞的分子、解剖學(xué)和生理學(xué)特性,創(chuàng)建小鼠腦細(xì)胞 3D 參考圖譜,同時(shí)也將基于人類和非人類靈長(zhǎng)類腦組織樣本,繪制腦細(xì)胞參考圖譜 ,其涉及空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)主要包括 MERFISH 和 seqFISH。一些實(shí)現(xiàn)空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的重要技術(shù),可以追溯到二十世紀(jì)七十年代,長(zhǎng)期以來,各種形式的原位雜交技術(shù)(ISH)已用于可視化空間中的基因表達(dá)。從技術(shù)原理中不難看出,空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)重要為特殊的載玻片。河南空間轉(zhuǎn)錄組應(yīng)用空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析軟件開發(fā)語言統(tǒng)計(jì)情況。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的如火如荼,伴隨著空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的蓬勃發(fā)展,可以看到,在現(xiàn)有的高通量檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域,這兩種技術(shù)已為科學(xué)研究的發(fā)展提供了前所未有的技術(shù)支撐。從2019年單細(xì)胞多組學(xué)被評(píng)為《Nature Methods》年度技術(shù)進(jìn)展,到2020年空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)也被評(píng)為年度技術(shù)進(jìn)展,相信在接下來的時(shí)間里,單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和空間轉(zhuǎn)錄組將為生命科學(xué)的發(fā)展做出極其重要的貢獻(xiàn)。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的特點(diǎn)在于提供詳實(shí)的每個(gè)細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄表達(dá)信息,但是缺失了來源組織的空間組成信息。現(xiàn)有商用空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的特點(diǎn)在于提供了完整的組織空間位置信息,但是每個(gè)捕獲spot的信息無法達(dá)到單細(xì)胞分辨率(10個(gè)左右細(xì)胞)。因此,這兩個(gè)技術(shù)的存在是天然互補(bǔ)的,而將兩者的結(jié)合也是水到渠成,完美結(jié)合。
第二,數(shù)據(jù)庫的建立。盡管當(dāng)前空間轉(zhuǎn)錄組的數(shù)據(jù)在快速地增長(zhǎng),但尚未有對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)庫來對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總集成。第三,研究物種及組織的多樣化。在當(dāng)前時(shí)代,除 LCM 之外,研究的***主要集中于人類和小鼠的大腦,而其他***(例如肝臟)的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究相對(duì)滯后。對(duì)除人類和小鼠以外的其他生物以及除大腦以外的其他***的技術(shù)現(xiàn)代化,將為開發(fā)有用的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)地圖集提供廣闊的前景。第四,集成度高、交互性強(qiáng)、易擴(kuò)展、文檔信息完善的開源工作流程的開發(fā)。該類工具的開發(fā)將簡(jiǎn)化不同類型空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的整合和分析??臻g轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)在進(jìn)行 HE 染色的同時(shí)需要保證獲取組織基因表達(dá)信息。
有哪些技術(shù)手段可以進(jìn)行空間轉(zhuǎn)錄組研究?已發(fā)表的關(guān)于空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)有Slide-seq , LCM-seq , seqFISH, MERFISH , Liver single cell zonation , Geo-seq and Tomo-seq。這些方法或是在細(xì)胞數(shù)量上限制較大,或是存在有效測(cè)序深度不足等問題。10x Genomics公司提供的Visium空間基因表達(dá)解決方案是目前較好的一個(gè)高通量空間轉(zhuǎn)錄組的商業(yè)化解決方案。該解決方案可以輕松地將空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)應(yīng)用到組織切片和染色的標(biāo)準(zhǔn)方法中,從而研究空間分辨率下整個(gè)轉(zhuǎn)錄組mRNA的表達(dá)情況,同時(shí)在同一組織切片中獲得組織學(xué)相關(guān)信息??臻g轉(zhuǎn)錄組使得我們?cè)跈z測(cè)基因表達(dá)的同時(shí)獲得基因在組織內(nèi)部的空間位置信息。甘肅技術(shù)空間轉(zhuǎn)錄組
空間轉(zhuǎn)錄組組織學(xué)板塊包括樣品的包埋、切片、固定、染色及成像,記錄切片的形態(tài)學(xué)信息。海南空間轉(zhuǎn)錄組做什么
Visium空間轉(zhuǎn)錄組能夠做何種組織類型以及推薦切片厚度是什么?10X Genomics測(cè)試過很多組織類型,絕大多數(shù)都可以用于空間轉(zhuǎn)錄組的分析。下圖是他們官網(wǎng)上測(cè)試過的組織類型的列表,測(cè)試過的組織都可以運(yùn)用在空間轉(zhuǎn)錄組的分析上面。但建議用戶用基因表達(dá)玻片做正式實(shí)驗(yàn)前,務(wù)必用組織優(yōu)化的玻片測(cè)試一下,看組織能否用于空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn),同時(shí)也找到比較好的組織通透時(shí)間。切片厚度基本上以10μm為主,但也有少量組織例外。歐易生物具有上百例空間轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目執(zhí)行經(jīng)驗(yàn),致力通過質(zhì)量的服務(wù),助力各位科研工作者取得新的突破。海南空間轉(zhuǎn)錄組做什么
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