空間轉錄組技術原理是什么?當組織冷凍切片附在空間轉錄組載片上時,條形碼引物結合并從組織中捕獲鄰近的mRNA。被捕獲的mRNA開始逆轉錄,得到的cDNA中包含了空間條形碼。分析Illumina測序結果中空間條形碼的序列,可以將每個mRNA轉錄的序列映射回組織切片中的起始位置。空間轉錄組的條形碼逆轉錄oligo(dT)引物在顯微鏡載玻片表面的有序附著,空間轉錄組使得在mRNA樣品處理和后續(xù)測序過程中位置信息的編碼和獲取成為可能。歐易生物具有上百例空間轉錄組項目執(zhí)行經驗,致力通過質量的服務,助力各位科研工作者取得新的突破。作者借助空間轉錄組測序技術探究人類心臟在發(fā)育過程中的基因表達特征和細胞圖譜變化。廣西歐易生物空間轉錄組規(guī)格
轉錄本的空間位置信息可以通過在原位陣列上捕獲的組織切片中的轉錄本來獲取,目前已有多種技術策略被開發(fā)報道, 如空間轉錄組技術(Spatial Transcriptomics,ST)和 Visium 技術,通過將包含空間位置信息的條形碼、UMI 標簽、poly-dT 的探針固定在商用微陣列載玻片上,來捕獲包含 poly(A) 尾巴的轉錄本,并獲取全轉錄組水平的基因表達及位置信息。一些無需成像即可計算重建空間基因表達模式所需信息的技術也被開發(fā)了出來,其中之一就是是 DNA 顯微技術,它記錄 cDNA 之間的接近度,該信息可用于重建轉錄本之間的相對位置。10x空間轉錄組價格了解空間轉錄組樣本準備注意事項。
10x Genomics空間轉錄組技術的準確性高嗎?下圖是一個將10x Genomics空間轉錄組技術應用于小鼠海馬體研究的案例。A圖為腦組織切片的HE染色結果,從10x Genomics空間轉錄組分析結果中,可以清晰看到Tmsb4x(B圖)和Selenow(C圖)在海馬體區(qū)域高表達,和已知的研究結果一致性較高。開展10x Genomics空間轉錄組需要做哪些準備?空間轉錄組是一項十分前沿的技術,涉及到很多細節(jié)方面的準備工作,例如組織類型的選擇、前期預實驗的設計、病理區(qū)域的確認等一系列內容。而且實驗中存在很多不確定性因素,處理不慎容易導致整個項目失敗。
本文利用空間轉錄組學研究了在AD小鼠模型中,淀粉樣斑塊周圍直徑為100mm的組織域中發(fā)生的轉錄變化。發(fā)現了富含髓鞘和少突膠質細胞基因(OLIGs)的基因共表達網絡的早期改變,而斑塊誘導的基因(PIGs)的多細胞基因共表達網絡涉及補體系統(tǒng)、氧化應激、溶酶體和炎癥,在疾病的后期非常突出。此外作者通過對小鼠和人腦切片進行原位測序(ISS),證實了大多數觀察到的細胞水平的變化??臻g轉錄組學分析為探究AD和其他腦部疾病致病特征附近失調的細胞網絡提供了可能??臻g轉錄組避免了組織中細胞位置信息的丟失。
有哪些技術手段可以進行空間轉錄組研究?已發(fā)表的關于空間轉錄組技術有Slide-seq , LCM-seq , seqFISH, MERFISH , Liver single cell zonation , Geo-seq and Tomo-seq。這些方法或是在細胞數量上限制較大,或是存在有效測序深度不足等問題。10x Genomics公司提供的Visium空間基因表達解決方案是目前較好的一個高通量空間轉錄組的商業(yè)化解決方案。該解決方案可以輕松地將空間轉錄組學技術應用到組織切片和染色的標準方法中,從而研究空間分辨率下整個轉錄組mRNA的表達情況,同時在同一組織切片中獲得組織學相關信息??臻g轉錄組是一種用于從空間層面上解析RNA-seq數據的技術,從而解析單個組織切片中的所有mRNA。10x空間轉錄組價格
10X Genomics 繼單細胞測序后也推出了空間轉錄組測序技術。廣西歐易生物空間轉錄組規(guī)格
早期空間轉錄組學的另一條發(fā)展路線是基因捕獲和增強子捕獲篩選,開發(fā)于二十世紀八十年代,當時 DNA 測序通量正在增加,動物基因組是新開放的前沿領域。果蠅和小鼠的篩選是在八十年代后期進行的,目的是觀察未靶向且通常未知的基因表達情況。隨著通量的增加,增強子和基因捕獲技術在九十年代成為空間轉錄組學的技術,直到 WMISH 在九十年代后期興起。WMISH 技術的自動化程度較高,避免了對轉基因品系的依賴,同時由于在二十一世紀初獲得物種的參考基因組信息變得越來越便利,探針設計因此也更為方便。廣西歐易生物空間轉錄組規(guī)格
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