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“做miRNA下調(diào)，QPCR檢測miRNA，表達水平無變化”如何解決呢？反義核酸是在轉錄后水平發(fā)揮功能，要阻斷miRNA的產(chǎn)生，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能實現(xiàn)，Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變，從而破壞miRNA表達，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運用Cas9技術，針對miR-21基因設計sgRNA ，通過慢病毒遞送細胞，并在RNA水平檢測到mir-21的下調(diào)表達，從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽（NPC）細胞生物學特性及其潛在機制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現(xiàn)出陽性，此外，溫醫(yī)大醫(yī)院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環(huán)狀RNA PRKCI（circPRKCI）通過抑制miR-545顯示致性，促進人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的病理進展3。所以，CRISPR / Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認可的、且以QPCR檢測表達量完全沒有問題。陜西凝血四項第三方檢測機構瑞普信生物技術有限公司專業(yè)基礎實驗第三方檢測公司。

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在做第三方檢測時為什么主帶之外有時會出現(xiàn)雜帶？導致雜帶出現(xiàn)的可能原因包括：抗體特異性不足，目的蛋白存在不同修飾狀態(tài)或有剪切降解形式，一抗或二抗使用過量，蛋白上樣量過大，曝光時間過長，膜漂洗不充分，等原因。通過條件優(yōu)化盡量減少雜帶出現(xiàn)，但當抗體或樣品特性造成少量雜帶存在時，只要不影響主目的條帶判別并不影響數(shù)據(jù)圖片的應用。為什么有時膠片會出現(xiàn)明顯較深的背景？在通過條件優(yōu)化排除諸如封閉不充分、樣品中存在雜質(zhì)、抗體過量、漂洗不充分等實驗原因之外，當特異性識別的目的條帶信號太弱時，為了顯示出目的條帶而不得不延長曝光時間，隨之使得背景變臟，此時關鍵點在于整個反應的“性噪比”太低，比較好換用特異性、親和力更佳的一抗。成都免疫組化抗體第三方檢測中心

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