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“做miRNA下調(diào)，QPCR檢測miRNA，表達(dá)水平無變化”如何解決呢？反義核酸是在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮功能，要阻斷miRNA的產(chǎn)生，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能實(shí)現(xiàn)，Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變，從而破壞miRNA表達(dá)，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運(yùn)用Cas9技術(shù)，針對miR-21基因設(shè)計(jì)sgRNA ，通過慢病毒遞送細(xì)胞，并在RNA水平檢測到mir-21的下調(diào)表達(dá)，從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽（NPC）細(xì)胞生物學(xué)特性及其潛在機(jī)制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現(xiàn)出陽性，此外，溫醫(yī)大醫(yī)院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環(huán)狀RNA PRKCI（circPRKCI）通過抑制miR-545顯示致性，促進(jìn)人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的病理進(jìn)展3。所以，CRISPR / Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認(rèn)可的、且以QPCR檢測表達(dá)量完全沒有問題。貴州AAV第三方檢測瑞普信生物技術(shù)有限公司專業(yè)第三方檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)！

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“做miRNA下調(diào)，QPCR檢測miRNA，表達(dá)水平無變化”，這到底是怎么回事？現(xiàn)有miRNA抑制手段，無論是基于載體構(gòu)建的、還是化學(xué)合成的，本質(zhì)上都是用跟成熟體互補(bǔ)的反義miRNA（miRNA海綿體屬于不完全互補(bǔ)的反義RNA重復(fù)），其可以通過結(jié)合miRNA，阻斷其與靶基因結(jié)合，但并不能有效引發(fā)miRNA的降解，原因有兩方面：其一是反義RNA與miRNA結(jié)合后，序列很短，導(dǎo)致Dicer酶（細(xì)胞內(nèi)降解雙鏈RNA的主角）不能有效結(jié)合；其二是miRNA與Ago2以RISC復(fù)合物的形式存在，該復(fù)合物也會導(dǎo)致Dicer酶無法高效結(jié)合。因此，如果以反義RNA技術(shù)抑制miRNA功能，QPCR可以做，如果檢測出表達(dá)水平下降還好，即便未檢測到，也不表示抑制無效，正確的做法是直接檢測目的基因蛋白水平是否有上調(diào)。但若實(shí)驗(yàn)者不清楚靶基因的情況下，不檢測到miRNA下調(diào)，心里是沒底的。瑞普信生物技術(shù)有限公司專業(yè)的第三方檢測Western Blot。西藏qPCR技術(shù)第三方檢測公司

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WB第三方檢測對于提供的樣本有什么要求？請?zhí)峁┑募?xì)胞數(shù)量保證5x106或更多，動物組織至少200mg以上，植物組織1g以上，須在取材后（比較好經(jīng)液氮速凍）保存于-80℃，干冰運(yùn)輸。取材時(shí)需盡量避免較多血液、泥土等干擾保留在材料表面，可用生理鹽水等迅速清洗后速凍。檢測抗體數(shù)量增多時(shí)樣本質(zhì)量須隨之增加。WB第三方檢測實(shí)驗(yàn)中一抗使用量需要多少？為什么有時(shí)目的條帶大小同理論預(yù)期分子量有偏差？當(dāng)條帶所示的實(shí)際大小同理論有偏差時(shí)，可能由以下一些原因?qū)е拢旱鞍装l(fā)生如磷酸化、糖基化等翻譯后修飾時(shí)條帶會上移，蛋白發(fā)生剪切（如前體）時(shí)條帶會下移，蛋白存在不同的可變剪切體或亞型，強(qiáng)相互作用大分子存在時(shí)變性不徹底。此外，WB實(shí)驗(yàn)中使用的預(yù)染蛋白marker由于攜帶染料程度不穩(wěn)定的原因，也可能導(dǎo)致表觀分子量與理論預(yù)期出現(xiàn)偏差。云南病理包埋第三方檢測公司

成都瑞普信生物技術(shù)有限公司坐落在成都高新區(qū)肖家河巷7號1層，是一家專業(yè)的成都瑞普信生物技術(shù)有限公司成立于2012年11月底，主營生物實(shí)驗(yàn)代測、技術(shù)咨詢、生物實(shí)驗(yàn)耗材及儀器設(shè)備銷售等業(yè)務(wù)。公司擁有一支高學(xué)歷高素質(zhì)的人才隊(duì)伍，深耕生物實(shí)驗(yàn)行業(yè)多年，擁有豐富的產(chǎn)品銷售經(jīng)驗(yàn)、專業(yè)知識，實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)人員均是研究生學(xué)歷、本科學(xué)歷，公司以用心做事、眾志成城，為祖國科研進(jìn)步而努力為文化，激勵(lì)每位員工奮斗前行。公司。目前我公司在職員工以90后為主，是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊(duì)。成都瑞普信生物技術(shù)有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋ELISA檢測，WB檢測，ELISA試劑盒，PCR試劑，堅(jiān)持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針，贏得廣大客戶的支持和信賴。一直以來公司堅(jiān)持以客戶為中心、ELISA檢測，WB檢測，ELISA試劑盒，PCR試劑市場為導(dǎo)向，重信譽(yù)，保質(zhì)量，想客戶之所想，急用戶之所急，全力以赴滿足客戶的一切需要。