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WB第三方檢測(cè)的整個(gè)過(guò)程是：制膠-上樣-電泳-轉(zhuǎn)膜-（清洗玻璃板）-封閉-抗體孵育，到的顯影。WB（Westernblot），即蛋白印跡或免疫印跡（immunoblotting），是一項(xiàng)在分子生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)等領(lǐng)域中應(yīng)用非常的技術(shù)。這一技術(shù)利用抗體與組織或細(xì)胞樣品中特定蛋白的特異性結(jié)合作用，根據(jù)顯色條帶的位置和強(qiáng)弱實(shí)現(xiàn)蛋白鑒定和表達(dá)分析。WB技術(shù)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性。選用合適的內(nèi)參抗體能夠校正蛋白定量和上樣過(guò)程中的誤差，通過(guò)灰度計(jì)量可以定性或定量分析不同樣品中蛋白表達(dá)情況。貴州耗材第三方檢測(cè)中心專(zhuān)業(yè)靠譜第三方檢測(cè)，就找瑞普信！

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    3充分裂解后。12000rpm離心5min，取上清。4取部分上清蛋白用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度，按如下步驟①按試劑盒說(shuō)明書(shū)將A液和B液以501的比例配制成工作液；②取2000μg/mL的BSA標(biāo)準(zhǔn)品，用PBSpH2000μg/mL、1500μg/mL、1000μg/mL、750μg/mL、500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、25μg/mL、0μg/mL共9時(shí)間就是金錢(qián)，效率就是生命唯有惜時(shí)才能成功，唯有努力方可成就個(gè)濃度梯度；③取上清液10μL，用PBS稀釋20倍；④每管中加20μL蛋白標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后的上清液，再加上述工作液，37℃孵育30min，562nm處測(cè)吸光度，記錄OD值；⑤根據(jù)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及相應(yīng)OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲曲線(xiàn)線(xiàn)yy00..00000077xx00..11553322RR2200..0..4400..8811..2211..000000濃濃度度uugg//mmLLOODD值值各各濃濃度度標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品線(xiàn)線(xiàn)性性各各濃濃度度標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算樣品總蛋白濃度（mg/mL）樣品.OD值mg/、Western-Blot檢測(cè)總蛋白中目的蛋白表達(dá)。1灌膠①蒸餾水清洗灌膠玻璃板，豎直晾干。②配制13％分離膠10mL，加TEMED10μL、10％過(guò)硫酸銨100μL，混勻后立即灌膠，灌至齒梳下緣2～3mm（事先做好標(biāo)記），用異丙醇封閉液面以去除氣泡并隔絕空氣，室溫靜置45min待膠完全聚合。瑞普信提供第三方WB基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。陜西免疫熒光抗體第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)

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