DNA探針是**常用的核酸探針,指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現(xiàn)已獲得DNA探針數(shù)量很多,有細菌、病毒、原蟲、***、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列,或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的,如細菌的毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應用。以細菌為例,分子雜交技術(shù)用于細菌的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要準確的多,是細菌分類學的一個發(fā)展方向。加之分子雜交技術(shù)的高敏感性,分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景。近年來半導體制程技術(shù)突飛猛進,超前摩爾定律預估法則好幾年,現(xiàn)階段已向7奈米以下挺進。徐匯區(qū)品牌探針維修價格
用此探針在DNA文庫中篩選,陽性克隆即是目標蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細胞和原核細胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內(nèi)含子序列,而原核則沒有。因此,真核基因組DNA探針用于檢測基因表達時雜交效率要明顯低于cDNA探針。DNA探針(包括cDNA探針)的主要優(yōu)點有下面三點:①這類探針多克隆在質(zhì)粒載體中,可以無限繁殖,取之不盡,制備方法簡便。②DNA探針不易降解(相對RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標記方法較成熟,有多種方法可供選擇,如缺口平移,隨機引物法,PCR標記法等,能用于同位素和非同位素標記。青浦區(qū)挑選探針按需定制主要用來分析固體物質(zhì)表面的細小顆?;蛭⑿^(qū)域,小范圍直徑為1μm左右。
電子探針儀鏡筒部分的構(gòu)造大體上和掃描電子顯微鏡相同,只是在檢測器部分使用的是X射線譜儀、專門用來檢測X射線的特征波長或特征能量,以此來對微區(qū)的化學成分進行分析。因此,除專門的電子探針儀外,有相當一部分電子探針儀是作為附件安裝在掃描電鏡或透射電鏡鏡筒上,以滿足微區(qū)組織形貌、晶體結(jié)構(gòu)及化學成分三位一體同位分析的需要 [1]。用波長色散譜儀(或能量色散譜儀)和檢測計數(shù)系統(tǒng),測量特征X射線的波長(或能量)和強度,即可鑒別元素的種類和濃度。
探針的標記方式有放射性標記和非放射性標記。標記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標記同位素,被標記的dNTP本身就帶有磷酸基團,便于標記。特點是比活性高,可達9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線能量高。用它標記的探針自顯影時間短,靈敏度高。32P的半壽期短,雖使用不方便,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標記法有酶標法和化學物標記法。酶標方法與免疫測定ELISA方法相似,只是被標記的核酸代替了被標記的抗體,事實上被標記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素、地高辛標記的。1953年前蘇聯(lián)制成了X射線微區(qū)分析儀,以后英、美等國陸續(xù)生產(chǎn)。
3 面分析用于測定某種元素的面分布情況。方法是將X射線譜儀固定在所要測量的某元素特征X射線信號的位置上,電子束在樣品表面做光柵掃描,此時在熒光屏上便可看到該元素的面分布圖像。顯像管的亮度由試樣給出的X射線強度調(diào)制。圖像中的亮區(qū)表示這種元素的含量較高。定量分析定量分析時,先測得試樣中Y元素的特征X射線強度IY,再在同一條件下測出已知純元素Y的標準試樣特征X射線強度IO。然后兩者分別扣除背底和計數(shù)器死時間對所測值的影響,得到相應的強度值IY和IO,兩者相除得到X射線強度之比KY= IY / IO。 直接將測得的強度比KY當作試樣中元素Y的重量濃度,其結(jié)果還有很大誤差,通常還需進行三種效應的修正。即原子序數(shù)效應的修正,吸收效應修正,熒光效應修正。經(jīng)過修正,誤差可控制在±2%以內(nèi)。背散射電子圖像系統(tǒng)。青浦區(qū)挑選探針按需定制
電子探針是法國制成的,是在1949年用電子顯微鏡和X射線光譜儀組合而成。徐匯區(qū)品牌探針維修價格
探針DNA克隆的篩選也可采用血清學方法,所不同的是所建DNA文庫為可表達性,克隆菌落或噬斑經(jīng)裂解后釋放出表達抗原,然后用來源細菌的多克隆抗血清篩選陽性克隆,所得到多個陽性克隆再經(jīng)其它細菌的抗血清篩選,***只與本細菌抗血清反應的表達克隆即含有此細菌的特異性基因片段,它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。對于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質(zhì)的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質(zhì),然后測定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列,然后根據(jù)這一序列合成一套寡核苷酸探針。徐匯區(qū)品牌探針維修價格
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