現(xiàn)有的單細胞測序技術(shù)陣營在幾個主要領(lǐng)域存在差別。一個是分隔單個細胞以在其中進行微反應的物理平臺。在這個空間，單個細胞的內(nèi)容物釋放，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標記或添加索引，以便下游識別?，F(xiàn)有技術(shù)的另一個主要區(qū)別是如何添加索引，就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣。10X Genomics單細胞測序平臺采用動態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，其中一列縱向孔道輸入細胞，凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時候，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫。經(jīng)驗豐富的實驗團隊，為獲得示組織內(nèi)真實表達水平的高質(zhì)量冷凍切片提供硬件和技術(shù)保障。廈門烈冰科技單細胞測序

單細胞獲得困難，不同組織要求不盡相同難以搞定？ 烈冰2000+項目消化經(jīng)驗，100+組織類型解離protocol，精心設計不同組織實驗的解離、細胞懸浮實驗體系，確保單細胞的獲得。 凍存樣本無法實驗，珍貴樣本無法使用？ 烈冰采用國際認可的凍存組織復蘇技術(shù)以及死細胞過濾技術(shù)，確保凍存組織使用。 珍貴樣本，細胞數(shù)量太少，消化背景雜無法做單細胞？ 采用國際認可的10X Genomics，BD Rhapsody雙平臺模式，根據(jù)樣本實際情況和用戶需求提供客觀有效的實驗方案,細胞量少，背景雜也能做單細胞。 單細胞RNA分類精度不足，部分細胞無法細分？ 烈冰同時采用單細胞蛋白質(zhì)組與單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，真正做到從上游到下游的全流程檢測，確保超高的細胞分類精度。廣州10X單細胞測序商業(yè)化服務單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。

關(guān)于單細胞測序?qū)嶒灅颖局苽?，這與流式細胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機械消化、細胞分選或其他細胞分離技術(shù)從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數(shù)和質(zhì)量控制步驟，以確保您的樣本有適當濃度的活細胞，并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要，您還可以使用抗體對樣本進行染色，標記細胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗目標而定。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細胞大小，以及是否需要提取出細胞核進行染色質(zhì)可接近性分析。無論具體的考慮因素如何，所有樣本類型都遵循同一個基本原則，那就是生成高質(zhì)量的單細胞懸液。

一味的追求高細胞數(shù)量的捕獲，小心得不償失，原因在這：單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行，而細胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后，獲得細胞基因表達譜，通過降維（pca），無監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式，因此即使是相同的數(shù)據(jù)，在剔除幾個細胞的情況下，前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同。而當細胞捕獲數(shù)過多時，無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細胞數(shù)據(jù)，都會對正常細胞聚類產(chǎn)生影響，造成聚類結(jié)果失真。這也是很多文章，特別是很多高分文章，為什么單個樣本捕獲細胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數(shù)在3000-5000個時，數(shù)據(jù)量在100G左右時，可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。烈冰斥巨資引進Novaseq6000，開啟更大通量測序新紀元。

10X Genomics 是一種基于 drop 的微流控技術(shù)，液體在配套芯片中的微管道中流動，因此細胞直徑會受到芯片中微管道直徑的限制，微流體通道的直徑約為 50 ~ 60 um，因此捕獲細胞的直徑不能超過 40um。當細胞直徑過大時，容易出現(xiàn)管道堵塞，造成GEM生成失敗，對于神經(jīng)科學研究和心血管疾病研究的老師而言，準備采用單細胞技術(shù)用于課題研究的時候，往往會遇到一個尷尬的問題，就是目標細胞，例如神經(jīng)元細胞、成熟心肌細胞由于體積過大，不適用于 10X 單細胞技術(shù)。其中神經(jīng)元細胞的直徑很大，直接超過了芯片中管道的直徑，雖然心肌細胞直徑低于 50um，但是成熟心肌細胞的長度很長，有可能堵塞通道造成實驗失敗，這也是為什么現(xiàn)在很多已發(fā)表的心臟單細胞文章，主要研究方向是心臟發(fā)育的原因了，主要還是因為未發(fā)育成熟的心肌細胞比較小，不會出現(xiàn)堵塞管道的風險。因此可以考慮組織解離后過 40um 濾網(wǎng)，過濾掉大細胞，避免出現(xiàn)管道堵塞、實驗失敗的風險。此種方案的缺點是大細胞被過濾掉，丟失相關(guān)細胞數(shù)據(jù)；另外組織解離獲得高質(zhì)量細胞懸液以后，繼續(xù)做細胞裂解抽細胞核，開展細胞核測序。具體可訪問烈冰官網(wǎng)給我們留言，烈小冰將安排專業(yè)技術(shù)為您詳細解答。單細胞測序技術(shù)提供了單個細胞水平下的科學研究視角。吉林10X Genomics單細胞測序服務機構(gòu)

烈冰測序數(shù)據(jù)分析平臺，不依賴已有物種信息，可研究非模式物種，針對不同平臺的數(shù)據(jù)，制定多套流程；廈門烈冰科技單細胞測序

基于10X Next GEM技術(shù)，單細胞測序一次實驗可以同時檢測近萬個細胞，可在一個樣本中同時獲3'端mRNA表達譜、如需和免疫組庫（TCR和BCR）的數(shù)據(jù)進行聯(lián)合時，即某些研究還需結(jié)合基因的表達譜和V(D)J數(shù)據(jù)進行復雜組織樣本的是影響免疫應答分析，監(jiān)測免疫療法的效果，研究疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機制，可進行單細胞免疫組庫測序： 烈冰單細胞免疫組庫平臺具備：1000+項目經(jīng)驗，一次實驗可同時獲取1000-20000個細胞的文庫構(gòu)建，獲得轉(zhuǎn)錄組和免疫組數(shù)據(jù)； 具備完善的免疫組庫測序和實驗質(zhì)控流程，獲取V(D)J全長序列的配對信息；豐富的免疫組庫測序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗，實現(xiàn)專屬個性化數(shù)據(jù)分析服務，搭配單細胞分析云平臺，一鍵導出交互性的動態(tài)結(jié)果報告。廈門烈冰科技單細胞測序

上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司致力于醫(yī)藥健康，是一家服務型公司。公司業(yè)務涵蓋單細胞測序，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺，空間轉(zhuǎn)錄組測序，單細胞多組學測序等，價格合理，品質(zhì)有保證。公司注重以質(zhì)量為中心，以服務為理念，秉持誠信為本的理念，打造醫(yī)藥健康良好品牌。烈冰生物秉承“客戶為尊、服務為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實”的經(jīng)營理念，全力打造公司的重點競爭力。