Single Cell Sequencing技術(shù)，即利用優(yōu)化后的高通量測序技術(shù)（NGS，Next Generation Sequencing）分析每一個單個細胞的序列信息，從而更高分辨率地揭示細胞間的細胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問題來了，如何獲得單個細胞？如果無法獲得單個細胞這一切都是不成立的；如何獲得大批量的單個細胞？單個組織細胞群體通常在百萬級別以上，如果被檢測的測序細胞數(shù)量過小精確度不足；如何低成本地獲得大批量單個細胞？單細胞測序成本非常高，尤其是需要測2000~3000個以上的細胞的時候，如果單個細胞的分選成本也很高，技術(shù)根本無法普及。所以，正因為這些問題的存在使得高通量測序在單個細胞測序應(yīng)用中的普及度一直不足，直到幾個突破性技術(shù)的誕生。烈冰生物全轉(zhuǎn)錄組測序通過雙文庫構(gòu)建，實現(xiàn)多種RNA的一網(wǎng)打盡。上海10X Chromium X單細胞測序百萬通量平臺

10X Genomics和Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，一列縱向孔道輸入細胞，凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時候，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫。西安二代測序單細胞測序百萬通量平臺單細胞科聯(lián)合空間轉(zhuǎn)錄組，展示組織切片中不同區(qū)域的基因表達情況，揭示精細病理區(qū)域中“喚醒”的信號通路。

基于10X Next GEM技術(shù)，單細胞測序一次實驗可以同時檢測近萬個細胞，可在一個樣本中同時獲3'端mRNA表達譜、如需和免疫組庫（TCR和BCR）的數(shù)據(jù)進行聯(lián)合時，即某些研究還需結(jié)合基因的表達譜和V(D)J數(shù)據(jù)進行復(fù)雜組織樣本的是影響免疫應(yīng)答分析，監(jiān)測免疫療法的效果，研究疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機制，可進行單細胞免疫組庫測序： 烈冰單細胞免疫組庫平臺具備：1000+項目經(jīng)驗，一次實驗可同時獲取1000-20000個細胞的文庫構(gòu)建，獲得轉(zhuǎn)錄組和免疫組數(shù)據(jù)； 具備完善的免疫組庫測序和實驗質(zhì)控流程，獲取V(D)J全長序列的配對信息；豐富的免疫組庫測序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗，實現(xiàn)專屬個性化數(shù)據(jù)分析服務(wù)，搭配單細胞分析云平臺，一鍵導(dǎo)出交互性的動態(tài)結(jié)果報告。

10× Genomics官方建議，當單細胞懸液活性低于70%時應(yīng)做去除死細胞操作，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec)。需要注意到，去除死細胞的操作會損失一定的細胞數(shù)量，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒有給出單細胞懸液含有多少細胞數(shù)量才建議做去除死細胞的操作?；诹冶嗄陠渭毎麥y序?qū)嶒灲?jīng)驗，建議當細胞懸液進行質(zhì)量和活性檢測后，考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細胞大量死亡，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細胞比例和狀態(tài)，失真嚴重，建議重新收集樣本進行新的實驗，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實驗結(jié)果的準確性。烈冰生物為您提供多平臺一站式全流程單細胞測序服務(wù)。

Fluidigm C1平臺作為應(yīng)用于單細胞測序（Single Cell RNA Sequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達（Fluidigm?）的微流控技術(shù)，大約在幾個小時中可以捕獲96個左右的細胞，進行各類的Single-Cell測序建庫。當然，通量還是比較小。但不可否認的是，現(xiàn)在很多非RNA類Single Cell測序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如Single Cell DNA-Seq，Single Cell ATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進行單細胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說，至少在10X和BD，或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測序技術(shù)之前，C1仍然會是市場上的重要組成部分。單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。吉林單細胞測序服務(wù)機構(gòu)

過去的十年，我們是知識的承載者；現(xiàn)在，我們在努力構(gòu)建醫(yī)學的大數(shù)據(jù)時代；未來我們將重新定義知識形態(tài)！上海10X Chromium X單細胞測序百萬通量平臺

從單細胞測序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細胞類型的功能解析，越來越需要一種多組學的細胞生物學視角。通過單細胞多組學——即對不同組學的數(shù)據(jù)集進行分析和整合——科學家能夠從同一個單細胞來源中檢測多種細胞特征。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達、細胞表面蛋白表達、免疫組庫序列（包括T細胞和B細胞受體）以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開放染色質(zhì)區(qū)域。隨著單個實驗可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù)，研究人員的獲益更多，包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力、減少因批次效應(yīng)引起的錯誤，并節(jié)省更多的高科技資源（從資助基金到人員時間）。上海10X Chromium X單細胞測序百萬通量平臺

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