相對于Smart-Seq技術(shù)在細胞數(shù)量上的問題，10X平臺普遍提供的細胞數(shù)量都在1000-20000不等的測序細胞量，這個量級的測序細胞量已經(jīng)可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型。因此，這兩種技術(shù)對于基于基因表達進行準(zhǔn)確細胞分型上，無論是從細胞數(shù)量上來說還是表達檢測可靠性來說，都會更實用。同時依托Random Cell Label技術(shù)，使得其對于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對于Smart-Seq數(shù)據(jù)來說，影響幾乎可以忽略不計（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測試結(jié)果，顯示無影響。烈冰斥巨資引進Novaseq6000，開啟更大通量測序新紀(jì)元。10X Genomics單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

烈冰生物搭建近10臺10XGemomics平臺，目前為全國范圍內(nèi)的高校、醫(yī)院和研究所等單位的科研學(xué)者提供鼓舞，10X微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)為8或16通道系統(tǒng)，每個通道上限可捕獲20000細胞，16通道一次可檢測細胞范圍為百萬級別的細胞水平。此外，單個細胞捕獲效率高達65%，可準(zhǔn)確鑒別稀有細胞類型，利于稀有樣本或小細胞量類型樣本研究；細胞可適性高，對細胞大?。ㄖ睆匠^40um細胞需要制備成細胞核）及類型無限制。細胞捕獲周期較短，能夠?qū)崿F(xiàn)自動分離，無需人工操作，1天內(nèi)可完成從細胞懸液到cDNA文庫構(gòu)建的所有的測序準(zhǔn)備工作。吉林10X Chromium X單細胞測序商業(yè)化服務(wù)單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關(guān)系，一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”。

針對單細胞測序的細胞上樣數(shù)，為什么不建議捕獲到的細胞數(shù)量越高越好？一味地追求高數(shù)量的細胞捕獲可能會存在一些問題。例如在上機細胞懸液濃度固定時，如果目標(biāo)細胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000，上樣細胞懸液體積勢必增加，在細胞懸液質(zhì)量不是很理想（細胞活性<90%、碎片率>5%、結(jié)團率均>5%）的情況下，引入的背景信號會增加，分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括：cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低。當(dāng)cell和non-cell無法有效區(qū)分時，會使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果！當(dāng)目標(biāo)細胞捕獲數(shù)很大時，多細胞率會增加，數(shù)據(jù)分析時，此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測數(shù)和UMI檢測數(shù)是正常cell的N倍（N是一個GEM包裹的細胞數(shù)），導(dǎo)致所有細胞的統(tǒng)計數(shù)據(jù)（單個細胞基因檢測中位數(shù)、單個細胞UMI檢測中位數(shù)）虛高。此部分“cell”雖然可以通過設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進行過濾，但是容易會有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測細胞的人為去除！

Fluidigm C1平臺作為應(yīng)用于單細胞測序（Single Cell RNA Sequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達（Fluidigm?）的微流控技術(shù)，大約在幾個小時中可以捕獲96個左右的細胞，進行各類的Single-Cell測序建庫。當(dāng)然，通量還是比較小。但不可否認的是，現(xiàn)在很多非RNA類Single Cell測序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如Single Cell DNA-Seq，Single Cell ATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進行單細胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說，至少在10X和BD，或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測序技術(shù)之前，C1仍然會是市場上的重要組成部分。測序的革新讓科學(xué)研究從個體基因差異逐漸轉(zhuǎn)為個體細胞的基因差異。

二代測序技術(shù)在測序方法上取得了重大突破，基于“邊合成邊測序”（sequencing by synthesis）和大規(guī)模平行測序技術(shù)（massive parallel analysis,MPS），使測序通量和讀取速度得到極大提升，例如Illumina Solexa測序儀。Illumina的測序原理可以簡化為四步：樣品文庫構(gòu)建、簇生成、測序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長限制，樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段，并在3'和5'端接上3種序列：1）Index，用于區(qū)分樣品來源；2）Adapter，用于結(jié)合測序通道上的位點；3）Primer binding site，用于結(jié)合PCR引物啟動擴增反應(yīng)。單細胞多組學(xué)測序可識別重要的轉(zhuǎn)錄因子，進行譜系和發(fā)育追蹤。北京10X Chromium X單細胞測序

烈冰科技成立10余年，為科研學(xué)者提供專注的測序數(shù)據(jù)分析服務(wù)。10X Genomics單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

對于單細胞測序而言，常常需要先構(gòu)建細胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項分析，并且數(shù)據(jù)分析時以細胞聚類（cell cluster）為討論對象，而不是像常規(guī)Bulk測序一樣以組別為分析對象，因此單細胞測序項目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴(yán)格，但是單細胞測序，特別是目的為圖譜研究時，需要通過提高樣本復(fù)雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細胞圖譜信息。因此，單細胞測序?qū)嶒炘O(shè)計時首先需要保證生物學(xué)重復(fù)，不同樣本來源的樣本建議單獨進行細胞解離和捕獲、建庫、測序，以保證捕獲到足夠的細胞數(shù)，單個樣本分別捕獲細胞時，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準(zhǔn)確性。10X Genomics單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大，現(xiàn)有一支專業(yè)技術(shù)團隊，各種專業(yè)設(shè)備齊全。在烈冰生物近多年發(fā)展歷史，公司旗下現(xiàn)有品牌NovelBio,烈冰生物,NovelBrain,PanoCell,烈冰智造等。公司堅持以客戶為中心、生物科技、醫(yī)藥科技、信息科技、計算機科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢，市場營銷策劃，市場信息咨詢與調(diào)查（不得從事社會調(diào)查、社會調(diào)研、民意調(diào)查、民意測驗），從事貨物及技術(shù)的進出口業(yè)務(wù)，計算機、軟件及耗材（除專控），軟件開發(fā)【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動】市場為導(dǎo)向，重信譽，保質(zhì)量，想客戶之所想，急用戶之所急，全力以赴滿足客戶的一切需要。誠實、守信是對企業(yè)的經(jīng)營要求，也是我們做人的基本準(zhǔn)則。公司致力于打造***的單細胞測序，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺，空間轉(zhuǎn)錄組測序，單細胞多組學(xué)測序。