單細胞測序結(jié)果動輒上百G數(shù)據(jù)量，龐大的數(shù)據(jù)對于分析平臺和分析能力有著很高的要求，首先針對下機數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié)：單細胞測序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列，不可避免的會出現(xiàn)低質(zhì)量的測序結(jié)果，存在各種情況的序列污染。因此序列過濾及質(zhì)量評估就會變得極為重要。序列質(zhì)量主要通過測序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來表征，即堿基測序結(jié)果的錯誤率在1%/0.1%以下的比例。理想的測序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30。保證數(shù)據(jù)獲得后的處理結(jié)果的準確性，為后續(xù)細胞類型鑒定和功能分析打下堅實基礎。烈冰開展了單細胞轉(zhuǎn)錄組、單細胞多組學以及空間轉(zhuǎn)錄組等多種產(chǎn)品在內(nèi)的全套科研解決方案。廣州10X Chromium X單細胞測序商業(yè)化服務

基于10XGeomics動態(tài)微流控技術(shù)，利用Tn5轉(zhuǎn)座酶酶切開放染色質(zhì)，形成短片段，單細胞ATAC測序在表觀基因組學水平上，揭示單細胞染色質(zhì)的可及性問題，區(qū)分細胞異質(zhì)性，獲得開放染色質(zhì)的位置、轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點、核小體的調(diào)控區(qū)域和染色質(zhì)狀態(tài)等信息，是單細胞表觀遺傳學的重要突破：分析每個細胞數(shù)千個獨特的染色質(zhì)開放區(qū)域，識別細胞類型和細胞狀態(tài)；識別重要的轉(zhuǎn)錄因子，進行譜系和發(fā)育追蹤；探究驅(qū)動細胞類型和狀態(tài)之間基因表達差異的非編碼序列；探究細胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡特征等。是當前重要的多組學研究基因表達和表觀遺傳學的手段。合肥高通量測序單細胞測序從樣本處理到終端數(shù)據(jù)分析，只要您需要，烈冰提供全流程的無憂服務。

10X Genomics單細胞轉(zhuǎn)錄組測序是利用單細胞水平上的高通量測序分析基因表達譜的技術(shù)，也是目前國內(nèi)和國際上公認的單細胞測序大規(guī)模實驗平臺技術(shù)，該平臺基于動態(tài)微流控原理，突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性，組織解離后，單個樣本一次上機能捕獲500-20000個細胞， 基于每個細胞分別建庫測序，獲得單個細胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達狀態(tài)，并鑒定細胞的類型，可以在不同樣本間從細胞類型的組成和豐度角度進行比較，反映細胞間的異質(zhì)性，提供足夠靈活的定制測定法以滿足多種實驗需要，并有效縮短實驗是時間和降低測序成本。

針對樣本活性的問題，10×Genomics官方建議當單細胞懸液活性低于70%時應做去除死細胞操作，但也需要注意到，去除死細胞的操作會損失一定的細胞數(shù)量，10×Genomics和MiltenyiBiotec都沒有給出單細胞懸液含有多少細胞數(shù)量才建議做去除死細胞的操作。基于烈冰多年單細胞測序?qū)嶒灲?jīng)驗，建議當細胞懸液進行質(zhì)量和活性檢測后，考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細胞大量死亡，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細胞比例和狀態(tài)，失真嚴重，建議重新收集樣本進行新的實驗，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實驗結(jié)果的準確性。單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。

機體為響應各種應激，其細胞會從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”；當細胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時，往往會經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組，導致一些基因被沉默，一些基因被重新“喚醒”，但純化這些瞬態(tài)細胞進行研究是很困難或不可能的；scRNA-seq擬時序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細胞狀態(tài)。擬時序分析，即根據(jù)不同細胞亞群基因表達量隨時間的變化情況，構(gòu)建細胞譜系發(fā)育，但這里的時間并不是真時間，而是一個虛擬的時間，是指的細胞與細胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個樣本中，也會存在多種不同的細胞形態(tài)。因此，不論測定了多少樣本，我們都可以采用擬時序分析對樣本中的細胞轉(zhuǎn)化和變化進行描述。烈冰專精單細胞多組學測序領(lǐng)域。廣州二代測序單細胞測序價格

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針對單細胞測序的細胞上樣數(shù)，為什么不建議捕獲到的細胞數(shù)量越高越好？一味地追求高數(shù)量的細胞捕獲可能會存在一些問題。例如在上機細胞懸液濃度固定時，如果目標細胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000，上樣細胞懸液體積勢必增加，在細胞懸液質(zhì)量不是很理想（細胞活性5%、結(jié)團率均>5%）的情況下，引入的背景信號會增加，分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括：cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fractionreadsincells偏低。當cell和non-cell無法有效區(qū)分時，會使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果！當目標細胞捕獲數(shù)很大時，多細胞率會增加，數(shù)據(jù)分析時，此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測數(shù)和UMI檢測數(shù)是正常cell的N倍（N是一個GEM包裹的細胞數(shù)），導致所有細胞的統(tǒng)計數(shù)據(jù)（單個細胞基因檢測中位數(shù)、單個細胞UMI檢測中位數(shù)）虛高。此部分“cell”雖然可以通過設置數(shù)據(jù)分析閾值進行過濾，但是容易會有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測細胞的人為去除！廣州10X Chromium X單細胞測序商業(yè)化服務

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