單細胞測序實驗再樣本細胞上機分選簽，需要對細胞數(shù)量、細胞活性進準判斷，這對SingleCell分選標記、建庫、下機數(shù)據(jù)的質量都具有著決定性的作用。如若細胞計數(shù)偏高，將會影響建庫的成功率；計數(shù)偏低，則會提高雙細胞的比例；而細胞活率過低，就會使測序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣，因此把好單細胞懸液質量這一關尤為重要。而在鋪板過程中，由于不同操作人員手法具有不可避免的差異，不同的液體流速將直接影響單細胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody單細胞分選平臺配套了專門定制的電動移液器，其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式，來對應各種不同的操作。通過已經設定的程序來控制液體的流速，大幅度降低人為操作習慣帶來的差異，保證實驗操作的一致性。十二年測序經驗，累計服務與5000余項重要科研項目。上海10X Genomics單細胞測序百萬通量平臺

10XGenomics和Drop-Seq具有類似的技術原理。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，一列縱向孔道輸入細胞，凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時候，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的CellBarcode和UMIBarcode連接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，構成我們的捕獲凝膠微珠。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligodT抓住mRNA構建文庫。成都高通量測序單細胞測序數(shù)據(jù)分析全線搭建10x Genomics單細胞測序平臺。

基于10XGeomics動態(tài)微流控技術，利用Tn5轉座酶酶切開放染色質，形成短片段，單細胞ATAC測序在表觀基因組學水平上，揭示單細胞染色質的可及性問題，區(qū)分細胞異質性，獲得開放染色質的位置、轉錄因子的結合位點、核小體的調控區(qū)域和染色質狀態(tài)等信息，是單細胞表觀遺傳學的重要突破：分析每個細胞數(shù)千個獨特的染色質開放區(qū)域，識別細胞類型和細胞狀態(tài)；識別重要的轉錄因子，進行譜系和發(fā)育追蹤；探究驅動細胞類型和狀態(tài)之間基因表達差異的非編碼序列；探究細胞類型特異性和基因調控網絡特征等。是當前重要的多組學研究基因表達和表觀遺傳學的手段。

關于單細胞測序實驗樣本制備，這與流式細胞術用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機械消化、細胞分選或其他細胞分離技術從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數(shù)和質量控制步驟，以確保您的樣本有適當濃度的活細胞，并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要，您還可以使用抗體對樣本進行染色，標記細胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗目標而定。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質量、樣本豐度、細胞大小，以及是否需要提取出細胞核進行染色質可接近性分析。無論具體的考慮因素如何，所有樣本類型都遵循同一個基本原則，那就是生成高質量的單細胞懸液。烈冰單細胞多組學測序助您探究細胞類型特異性和基因調控網絡特征。

一味的追求高細胞數(shù)量的捕獲，小心得不償失，原因在這：單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行，而細胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后，獲得細胞基因表達譜，通過降維（pca），無監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式，因此即使是相同的數(shù)據(jù)，在剔除幾個細胞的情況下，前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同。而當細胞捕獲數(shù)過多時，無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細胞數(shù)據(jù)，都會對正常細胞聚類產生影響，造成聚類結果失真。這也是很多文章，特別是很多高分文章，為什么單個樣本捕獲細胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數(shù)在3000-5000個時，數(shù)據(jù)量在100G左右時，可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。單個細胞的基因結構和基因表達狀態(tài)，并鑒定細胞的類型。長沙二代測序單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

烈冰開展了單細胞轉錄組、單細胞多組學以及空間轉錄組等多種產品在內的全套科研解決方案。上海10X Genomics單細胞測序百萬通量平臺

烈冰科技自主研發(fā)的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù)，深度解讀數(shù)據(jù)分析結果，深入挖掘其背后的生物學意義；從操作便捷、結果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細胞研究，加速科研進程！此外，烈冰生信團隊根據(jù)豐富的實戰(zhàn)經驗為用戶量身打造了一款單細胞測序結果解讀的神兵利器——單細胞瀏覽器（SingleCellBrowser），不但可以將海量復雜的結果文件可視化，還是可以實現(xiàn)三維立體化展示的軟件。專業(yè)的生信代碼交給專業(yè)的烈冰，專業(yè)的生物學意義交給專業(yè)的您，詳情請咨詢烈冰生物。上海10X Genomics單細胞測序百萬通量平臺

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