單細(xì)胞測序技術(shù)（SingleCellSequencing）從一種新興的研究角度，借助已有的高通量測序手段，幫助研究者在樣本中細(xì)胞的異質(zhì)性、免疫微環(huán)境、發(fā)育學(xué)、免疫學(xué)以及其他領(lǐng)域中進(jìn)行單細(xì)胞層面的數(shù)據(jù)解析，解決了BulkPopulationSequencing所無法解決的問題。這樣一個新的研究領(lǐng)域必然也需要足夠可靠的實(shí)驗(yàn)手段來支撐。BDRhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng)為此提供了完善的硬件設(shè)備，保證了從單細(xì)胞懸液質(zhì)量評估到單細(xì)胞分選標(biāo)記過程中每一個實(shí)驗(yàn)步驟的準(zhǔn)確質(zhì)控。NovelBio單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊借助BDRhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng)，在實(shí)驗(yàn)實(shí)施層面對單細(xì)胞測序結(jié)果的可靠性提供了強(qiáng)有力的保證。繼單細(xì)胞懸液制備之后，又在另一道關(guān)鍵關(guān)卡提供了可靠的支持，幫助研究者在單細(xì)胞測序領(lǐng)域收獲更多的成果。單細(xì)胞測序因其強(qiáng)大的探究疾病--細(xì)胞--基因的關(guān)系，一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”。廣州二代測序單細(xì)胞測序平臺

對于單細(xì)胞測序而言，常常需要先構(gòu)建細(xì)胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項分析，并且數(shù)據(jù)分析時以細(xì)胞聚類（cellcluster）為討論對象，而不是像常規(guī)Bulk測序一樣以組別為分析對象，因此單細(xì)胞測序項目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴(yán)格，但是單細(xì)胞測序，特別是目的為圖譜研究時，需要通過提高樣本復(fù)雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細(xì)胞圖譜信息。因此，單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)設(shè)計時首先需要保證生物學(xué)重復(fù)，不同樣本來源的樣本建議單獨(dú)進(jìn)行細(xì)胞解離和捕獲、建庫、測序，以保證捕獲到足夠的細(xì)胞數(shù)，單個樣本分別捕獲細(xì)胞時，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準(zhǔn)確性。廣州高通量測序單細(xì)胞測序商業(yè)化服務(wù)烈冰測序服務(wù)已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表。

細(xì)胞中基因的表達(dá)是嚴(yán)格按照時間和空間順序發(fā)生，因此細(xì)胞類型和基因表達(dá)具有時間特異性和空間特異性。時間特異性可以通過收集不同時間點(diǎn)的樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序來分析。但是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序（scRNA-Seq）在單細(xì)胞懸液制備的過程中破壞了細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu)，無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個問題，其以點(diǎn)陣形式記錄組織切片細(xì)胞的空間信息，在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，獲得細(xì)胞/基因的空間表達(dá)特異性。

單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個共同過程，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析。不過，每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫，從而測定整個轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn)，并通過熒光測定表達(dá)水平。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn)，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析。然而，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個微反應(yīng)容器中。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA，確保來自每個細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞。與RNA-seq相似，帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測序文庫，從而能夠?qū)γ總€細(xì)胞的整個轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測定。全線搭建10X Genomics Chromium X單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)測序平臺。

SingleCellSequencing技術(shù)，即利用優(yōu)化后的高通量測序技術(shù)（NGS，NextGenerationSequencing）分析每一個單個細(xì)胞的序列信息，從而更高分辨率地揭示細(xì)胞間的細(xì)胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問題來了，如何獲得單個細(xì)胞？如果無法獲得單個細(xì)胞這一切都是不成立的；如何獲得大批量的單個細(xì)胞？單個組織細(xì)胞群體通常在百萬級別以上，如果被檢測的測序細(xì)胞數(shù)量過小精確度不足；如何低成本地獲得大批量單個細(xì)胞？單細(xì)胞測序成本非常高，尤其是需要測2000~3000個以上的細(xì)胞的時候，如果單個細(xì)胞的分選成本也很高，技術(shù)根本無法普及。所以，正因?yàn)檫@些問題的存在使得高通量測序在單個細(xì)胞測序應(yīng)用中的普及度一直不足，直到幾個突破性技術(shù)的誕生。全線搭建10x Genomics單細(xì)胞測序平臺。西安10X Chromium X單細(xì)胞測序服務(wù)公司

烈冰全線實(shí)驗(yàn)平臺滿足超深度、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復(fù)雜疾病研究的測序。廣州二代測序單細(xì)胞測序平臺

10×Genomics單細(xì)胞方案要求使用具有較高活性的單細(xì)胞懸液。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)因?yàn)闃颖绢愋秃椭苽鋯渭?xì)胞懸液方法的不同，容易出現(xiàn)單細(xì)胞懸液中死亡細(xì)胞的比例較高的情況。去除單細(xì)胞懸液中的死細(xì)胞和其他污染物對獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)是至關(guān)重要的。這是因?yàn)?，死亡的?xì)胞易裂解導(dǎo)致其中的RNA釋放出來。這種cell-freeRNA會導(dǎo)致檢測的背景噪聲，并會影響單細(xì)胞數(shù)據(jù)的質(zhì)量。因此當(dāng)樣本活性較差時，對細(xì)胞懸液中細(xì)胞活性檢測后，需要進(jìn)行一般死細(xì)胞去除的工作（一般懸液活性小于70%時考慮此操作），以保證較高的上機(jī)捕獲細(xì)胞的質(zhì)量。廣州二代測序單細(xì)胞測序平臺

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