為什么需要單細胞分辨率？生物學就像宇宙一樣。它非常復雜，有許多獨特的單體，也就是細胞。這些細胞相互作用并扮演不同的角色，在更大的體系中構建并驅動多個過程。就像伽利略探索宇宙的努力一樣，發(fā)現(xiàn)和定義這些細胞也需要高分辨率的工具，才能解開促成生物學復雜性的基因表達異質性。單細胞測序能夠在以一個細胞為功能單位中開展生物學研究，闡明具體細節(jié)，構建出一幅更大、更精細的圖譜，說明導致產生某種外在表型的不同類型的分子和細胞之間是如何相互作用的：患者為什么會復發(fā)？是什么讓這種疫苗能夠有效防止傳染等等諸多問題。單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關系，一度成為高通量測序技術的“天花板”。廣州高通量測序單細胞測序數(shù)據(jù)分析

二代測序技術在測序方法上取得了重大突破，基于“邊合成邊測序”（sequencingbysynthesis）和大規(guī)模平行測序技術（massiveparallelanalysis,MPS），使測序通量和讀取速度得到極大提升，例如IlluminaSolexa測序儀。Illumina的測序原理可以簡化為四步：樣品文庫構建、簇生成、測序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長限制，樣品DNA或由RNA逆轉錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段，并在3和5端接上3種序列：1）Index，用于區(qū)分樣品來源；2）Adapter，用于結合測序通道上的位點；3）Primerbindingsite，用于結合PCR引物啟動擴增反應。

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關于單細胞測序實驗樣本制備，這與流式細胞術用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機械消化、細胞分選或其他細胞分離技術從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數(shù)和質量控制步驟，以確保您的樣本有適當濃度的活細胞，并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要，您還可以使用抗體對樣本進行染色，標記細胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗目標而定。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質量、樣本豐度、細胞大小，以及是否需要提取出細胞核進行染色質可接近性分析。無論具體的考慮因素如何，所有樣本類型都遵循同一個基本原則，那就是生成高質量的單細胞懸液。

關于10XGenomics單細胞平臺的樣本類型和樣本制備：10X平臺在上機前需要注意細胞消化后的細胞團塊，獲得分離良好的細胞懸液、無細胞隨便、極少的細胞團塊，且細胞活力高（＞70%）；此外，了解您所研究細胞的大小范圍也很重要。細胞大小通常與細胞表達的轉錄本數(shù)量有關。各種尺寸不同的細胞（一般直徑不大于50μm）均可與我們基因表達解決方案中使用的10XGenomics平臺兼容。一般來說，細胞制備方案將根據(jù)組織來源和細胞類型而變化。每種組織類型都是獨特的，因此，必須在開始任何單細胞實驗之前優(yōu)化樣本制備，烈冰多年樣本解離消化經驗，累積10+物種、50+組織的消化protocol，若您的樣本為組織，且尚未成功將組織樣本消化成單細胞懸液，烈冰將盡可能提供技術及實驗上的幫助。個性化制定測序項目方面，滿足從檢測基因到蛋白的多組學測序要求。

烈冰科技專注為科研學者提供專注的測序數(shù)據(jù)分析服務，先后經歷基因芯片時代、基因測序、轉錄組測序時代...在科技日新月異的洪流中始終獨占鰲頭。2018年以來，單細胞測序進入發(fā)展的快車道，烈冰作為國內首批引進單細胞實驗雙平臺的公司，依托自主研發(fā)的NovelBrain®生物大數(shù)據(jù)分析平臺，為用戶提供一站式全流程的單細胞測序服務和解決方案。4年的單細胞技術的積累，烈冰已具備大鼠、小鼠、斑馬魚、猴、裸鼴鼠、水稻、擬南芥等10+物種，皮膚、腦、脂肪、心臟、花序等50+組織類型，100+細胞類型，1000+靶標基因，10000+樣本處理經驗。烈冰專研單細胞多組學測序領域。西安二代測序單細胞測序商業(yè)化服務

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烈冰生信團隊傾情研發(fā)的NovelBrain®生信大數(shù)據(jù)分析平臺，針對龐大的單細胞測序數(shù)據(jù)，能夠實現(xiàn)細胞類型鑒定的快、精、準：一鍵導入genelist構建個性化基因列表；輕松一點即可展示Marker基因的Featureplot；任意修改Cluster的顏色和名稱助力高效鑒定細胞類型；一鍵獲得t-SNE圖、Heatmap和Violin圖：輕松獲得并下載基因表達的t-SNE圖、Heatmap、Violin圖，還可以通過調節(jié)寬、高和系數(shù)比例來調節(jié)美觀。平臺上線300+task自主分析工具、50+pipeline工作流模板，幫助烈冰生信分析團隊和自主分析用戶實現(xiàn)分析工具和模板的快速調用和一站式全流程自動化分析，節(jié)省工作時間并提升整體工作效率廣州高通量測序單細胞測序數(shù)據(jù)分析

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