樣本制備后的保存為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對細胞進行清洗和計數(shù)后，單細胞懸液應當保存于冰上，直至用于后續(xù)的上機和文庫制備步驟。在理想狀況下，一旦制備好樣本，應當在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而，您還有必要了解各類細胞的不同性質(zhì)，因為這可能會影響細胞應在冰上保存的時間，以及它們在制備后多久便應當被盡快使用。例如，有些細胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時間，它們就開始形成團塊。這些團塊很難解離，增加了堵塞的風險，而且每個團塊被當成單細胞計數(shù)，又降低了細胞計數(shù)的準確性。此外，有些細胞更加粘稠，形成團塊的速度更快。對于這些細胞，必須盡量減少制備和使用之間的時間差?；凇办o態(tài)蜂巢”技術(shù)，實現(xiàn)落孔細胞的物力分割和磁珠的一對一匹配。湖州BD VDJ單細胞轉(zhuǎn)錄組測序

單細胞獲得困難，不同組織要求不盡相同難以搞定？烈冰2000+項目消化經(jīng)驗，100+組織類型解離protocol，精心設(shè)計不同組織實驗的解離、細胞懸浮實驗體系，確保單細胞的獲得。凍存樣本無法實驗，珍貴樣本無法使用？烈冰采用國際認可的凍存組織復蘇技術(shù)以及死細胞過濾技術(shù)，確保凍存組織使用。珍貴樣本，細胞數(shù)量太少，消化背景雜無法做單細胞？采用國際認可的10XGenomics，BDRhapsody雙平臺模式，根據(jù)樣本實際情況和用戶需求提供客觀有效的實驗方案,細胞量少，背景雜也能做單細胞。單細胞RNA分類精度不足，部分細胞無法細分？烈冰同時采用單細胞蛋白質(zhì)組與單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，真正做到從上游到下游的全流程檢測，確保超高的細胞分類精度。珠海BD VDJ單細胞多組學測序從樣本處理到終端數(shù)據(jù)分析，只要您需要，烈冰提供全流程的無憂服務。

單細胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單細胞水平上高通量測序分析基因表達譜的技術(shù)，突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性，組織解離后，單個樣本一次上機能捕獲500-20000個細胞，基于每個細胞分別建庫測序，獲得單個細胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達狀態(tài)，并鑒定細胞的類型，可以在不同樣本間從細胞類型的組成和豐度角度進行比較，反映細胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10XGenomicsChromiumX平臺實現(xiàn)了單塊chip上的百萬級別通量的細胞捕獲，系統(tǒng)實現(xiàn)16個通道同時運行，每個通道可捕獲2000-20000個細胞（不混樣），并支持原ChromiumController體統(tǒng)外的多種細胞捕獲百萬級別通量實驗，可準確鑒別稀有細胞類型和適配大規(guī)模單細胞研究。

根據(jù)烈冰多年單細胞測序服務經(jīng)驗，為什么不建議您一味的追求高細胞數(shù)量的捕獲：單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行，而細胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后，獲得細胞基因表達譜，通過降維（pca），無監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式，因此即使是相同的數(shù)據(jù)，在剔除幾個細胞的情況下，前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同。而當細胞捕獲數(shù)過多時，無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細胞數(shù)據(jù)，都會對正常細胞聚類產(chǎn)生影響，造成聚類結(jié)果失真。這也是很多文章，特別是很多高分文章，為什么單個樣本捕獲細胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數(shù)在3000-5000個時，數(shù)據(jù)量在100G左右時，可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。BD平臺基于cyto-seq技術(shù)，實現(xiàn)細胞和磁珠的一對一結(jié)合。

細胞計數(shù)和活力評估在評估樣本質(zhì)量時，需要在細胞清洗和過濾之后測定細胞活力，這一點至關(guān)重要。測定細胞活力有許多種方法，烈冰多年單細胞測序經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)臺盼藍法在鑒定活細胞與死細胞的比例時效果很好。細胞計數(shù)的準確性以及目標回收量和實際回收量之間的一致性，取決于我們了解樣本中有多少個細胞。一旦過濾和清洗完成，可采用細胞計數(shù)設(shè)備（如血球計數(shù)器或自動細胞計數(shù)儀）進行定量。這些設(shè)備不但能提供準確的細胞計數(shù)，還能計算出向微流體芯片上樣適量細胞所需的細胞懸液體積。單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關(guān)系，一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”。吉林BD單細胞多組學測序

單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。湖州BD VDJ單細胞轉(zhuǎn)錄組測序

針對單細胞測序數(shù)據(jù)分析時的reads數(shù)、基因表達量及細胞數(shù)量判定過程中：以捕獲5000個細胞、100G的測序量為標準，每個細胞的reads數(shù)大約在50k左右；每個細胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細胞類型，例如成熟的B，T，粒細胞數(shù)量較多的組織中，由于該類型細胞表達的基因數(shù)普遍較少，導致基因中位數(shù)下降。而某些疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細胞等，他們的基因表達數(shù)較高，甚至可以超過1W，這就導致該類樣本基因中位數(shù)非常高。因此，我們對細胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認時，需要考察實際組織的細胞組成。湖州BD VDJ單細胞轉(zhuǎn)錄組測序

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