為了達(dá)到研究目的,在轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中加入轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑也能有效提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。目前根據(jù)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的作用機(jī)制可分為兩大類:入胞增強(qiáng)子和入胞后增強(qiáng)子。入胞增強(qiáng)子作用于病毒的附著或進(jìn)入過程,通過在物理上增加病毒載體顆粒和靶細(xì)胞之間的共定位或降低它們之間的排斥力發(fā)揮作用。而入胞后增強(qiáng)子是在病毒進(jìn)入細(xì)胞后發(fā)揮作用,降低細(xì)胞質(zhì)中運(yùn)輸阻礙,Zui終獲得更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞比例并提高細(xì)胞內(nèi)VCN。基因zhi liao的臨床效果取決于細(xì)胞的高水平轉(zhuǎn)導(dǎo),雖可通過二次轉(zhuǎn)導(dǎo)或提高gan ran復(fù)數(shù)(multiplicityofinfection,MOI)增加轉(zhuǎn)導(dǎo)率,但延長體外培養(yǎng)時間可誘導(dǎo)干細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期而影響其分化增殖能力;提高gan ran復(fù)數(shù)會提高插入突變風(fēng)險和增加生產(chǎn)成本。什么試劑可以增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率?干細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑
LentiBOOST可應(yīng)用于多種臨床相關(guān)細(xì)胞類型,包括CD34+造血干細(xì)胞(HSCs),間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),神經(jīng)干細(xì)胞,原代T細(xì)胞,NK細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等,對于難轉(zhuǎn)導(dǎo)的小鼠T細(xì)胞亦有效。已成為改進(jìn)體外基因zhi liao和CAR-T細(xì)胞zhi liao的臨床轉(zhuǎn)導(dǎo)方案的理想選擇。近幾年LentiBOOST作為一種無毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑guang fan引起關(guān)注。LentiBOOST通過與細(xì)胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。研究證實LentiBOOST在不影響轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞存活、增殖及分化能力的前提下,提高小鼠T細(xì)胞、HSCs和人HSCs的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。為提供更好的服務(wù),上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司代理的SIRION Biotech GmbH品牌現(xiàn)已正式變更為Revvity Gene Delivery GmbH。我司仍將作為Revvity Gene Delivery在中國區(qū)域LentiBOOST產(chǎn)品業(yè)務(wù)的Exclusive Distributor,LentiBOOST在中國市場的營銷和技術(shù)支持工作仍將由上海曼博生物負(fù)責(zé)。自動化慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案什么試劑可以增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率呢?
慢病毒載體的研究發(fā)展得很快,研究的也非常深入,在美國已經(jīng)開展了臨床研究,效果非常理想,因此具有廣闊的應(yīng)用前景。慢病毒也被guang fan地應(yīng)用于表達(dá)RNAi的研究中。由于有些類型細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染效果差,轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)的siRNA半衰期短,體外合成siRNA對基因表達(dá)的抑制作用通常是短暫的,因而使其應(yīng)用受到較大的限制。近幾年LentiBOOST作為一種無毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑guang fan引起關(guān)注。LentiBOOST通過與細(xì)胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。研究證實LentiBOOST在不影響轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞存活、增殖及分化能力的前提下,提高小鼠T細(xì)胞、HSCs和人HSCs的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。為提供更好的服務(wù),上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司代理的SIRION Biotech GmbH品牌現(xiàn)已正式變更為Revvity Gene Delivery GmbH。我司仍將作為Revvity Gene Delivery在中國區(qū)域LentiBOOST產(chǎn)品業(yè)務(wù)的Exclusive Distributor,LentiBOOST在中國市場的營銷和技術(shù)支持工作仍將由上海曼博生物負(fù)責(zé)。
在病毒附著到宿主細(xì)胞后,病毒RNA滲透進(jìn)宿主細(xì)胞,并以此為模板,利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成病毒cDNA,在逆轉(zhuǎn)錄和合成雙鏈DNA的過程中,RNA的兩端都進(jìn)行了復(fù)制,產(chǎn)生了長末端重復(fù)序列(LTRs),在雙鏈的病毒DNA中,每條鏈含有U3-R-U5序列,然后雙鏈DNA被運(yùn)送到細(xì)胞核內(nèi)。新合成的逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA整合到宿主DNA中,稱為原病毒。原病毒在細(xì)胞周期過程中復(fù)制,然后傳遞給子細(xì)胞。不像其他逆轉(zhuǎn)錄病毒科成員,慢病毒可以有效地ganran不分裂的細(xì)胞,這使它們更有吸引力用于基因zhiliao。Zuihou,子代病毒基因組從整合的DNA轉(zhuǎn)錄到細(xì)胞質(zhì)中。病毒粒子從質(zhì)膜出芽獲得其脂質(zhì)包膜。在出芽過程中,病毒蛋白被病毒蛋白酶裂解,產(chǎn)生成熟的ganranxingbing毒粒子。慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可使用LentiBOOST產(chǎn)品。更多關(guān)于LentiBOOST慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)是用來做什么的呢?
目前的基因&細(xì)胞zhi liao主要采用病毒和非病毒兩種載體形式。根據(jù)統(tǒng)計,病毒載體約占進(jìn)行臨床實驗的項目 65%;而慢病毒因無嚴(yán)重的臨床事故出現(xiàn)成為目前相對安全的病毒載體選擇之一。慢病毒載體具有能gan ran非分裂期細(xì)胞、容納外源性目的基因片段大、穩(wěn)定性強(qiáng)、免疫原性小等特點(diǎn)。大量研究表明,相對其他病毒載體,慢病毒gan ran效率高,更容易gan ran一些較難gan ran的組織和細(xì)胞,其效率一般可以達(dá)到 30%-95% 以上。病毒顆的限制性攝取粒往往會降低基因或 shRNA 表達(dá)的成功率,并要求應(yīng)用更高的病毒滴度。然而,增加病毒數(shù)量以促進(jìn)表達(dá)可能會導(dǎo)致許多細(xì)胞類型的毒性副作用,并帶來不必要的昂貴成本。德國 Sirion Biotech 公司研發(fā)了 LentiBOOST 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,專為提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)難轉(zhuǎn)的哺乳動物和嚙齒動物細(xì)胞的效率。為提供更好的服務(wù),上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司代理的SIRION Biotech GmbH品牌現(xiàn)已正式變更為Revvity Gene Delivery GmbH。我司仍將作為Revvity Gene Delivery在中國區(qū)域LentiBOOST產(chǎn)品業(yè)務(wù)的Exclusive Distributor,LentiBOOST在中國市場的營銷和技術(shù)支持工作仍將由上海曼博生物負(fù)責(zé)。國內(nèi)做慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的公司。干細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑
用什么試劑可以做慢病毒轉(zhuǎn)染?干細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑
慢病毒是一種有包膜的RNA病毒,直徑為80-120nm,呈二十面體對稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒Zui外層是包膜(包膜蛋白決定了han ran細(xì)胞的類型),再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼,Zui里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒han ran的xian zhu特點(diǎn)是han ran個體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前,大多經(jīng)歷長達(dá)數(shù)年的潛伏期,之后緩慢發(fā)病,因此這些病原體被稱為慢病毒。慢病毒載體是指以人類免疫缺陷病毒-1 (HIV-1) 來源的一種病毒載體,慢病毒載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息,是慢病毒載體系統(tǒng)的主要組成部分。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質(zhì)粒、細(xì)胞系的輔助下,經(jīng)過病毒包裝成為有han ran力的病毒顆粒,通過han ran細(xì)胞或huo ti組織,實現(xiàn)外源基因在細(xì)胞或huo ti組織中表達(dá)。更多關(guān)于慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,歡迎咨詢上海曼博生物!干細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑