注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務必使用高質(zhì)量轉染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。歡迎關注曼博生物公眾號:Mine-bio專為細胞實驗設計,PEI轉染試劑提升基因表達效率。陽離子聚合物PEI轉染試劑蛋白產(chǎn)量
PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,可制備大量轉染試劑KyforaBiobyPolysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。PEIMAX40K是由KyforaBiobyPolysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科學家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑。多年以來,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻表明,在HEK293、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉染效率,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細胞轉染方案相比,使用PEIMAX至少可降低40%轉染成本(部分案例可降低90%轉染成本)。更多關于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!陽離子聚合物PEI轉染試劑蛋白產(chǎn)量哪個品牌的PEI轉染試劑性價比高?
細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達。
穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑的穩(wěn)定性如何?
抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質(zhì),轉染試劑、病毒轉導試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉化;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術,分享研發(fā)工具進步帶來的技術紅利,終為細胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學行業(yè)等乃至整個生命科學行業(yè)賦能!更多關于轉染試劑相關產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio 有人知道PEI轉染試劑的價格么?陽離子聚合物PEI轉染試劑蛋白產(chǎn)量
PEI轉染試劑的主要分子量是多少?陽離子聚合物PEI轉染試劑蛋白產(chǎn)量
產(chǎn)品簡介:KyforaBiobyPolysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即KyforaBiobyPolysciences23966(PEI25K)轉染效率表現(xiàn)優(yōu)良。產(chǎn)品特點:適用于生產(chǎn)mABs、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV、LV、BEV);在HEK293、CHO和Sf9細胞系中高度有效;適用于從研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的各個階段;可預測,可大規(guī)模生產(chǎn);兩周內(nèi)即可生成大量目標蛋白或病毒;高轉染效率;大量已發(fā)表的文獻支持。陽離子聚合物PEI轉染試劑蛋白產(chǎn)量