慢病毒是一種有包膜的RNA病毒,直徑為80-120nm,呈二十面體對稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒Zui外層是包膜(包膜蛋白決定了gan ran細胞的類型),再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼,Zui里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒gan ran的xian zhu特點是gan ran個體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前,大多經(jīng)歷長達數(shù)年的潛伏期,之后緩慢發(fā)病,因此這些病原體被稱為慢病毒。慢病毒載體是指以人類免疫缺陷病毒-1 (HIV-1) 來源的一種病毒載體,慢病毒載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息,是慢病毒載體系統(tǒng)的主要組成部分。什么試劑可以增加慢病毒轉(zhuǎn)導的速度?制備慢病毒轉(zhuǎn)導protocol
LentiBOOST可應(yīng)用于多種臨床相關(guān)細胞類型,包括CD34+造血干細胞(HSCs),間充質(zhì)干細胞(MSCs),神經(jīng)干細胞,原代T細胞,NK細胞和成纖維細胞等,對于難轉(zhuǎn)導的小鼠T細胞亦有效。已成為改進體外基因zhi liao和CAR-T細胞zhi liao的臨床轉(zhuǎn)導方案的理想選擇。近幾年LentiBOOST作為一種無毒性的化學轉(zhuǎn)導增強劑guang fan引起關(guān)注。LentiBOOST通過與細胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運,提高轉(zhuǎn)導效率。研究證實LentiBOOST在不影響轉(zhuǎn)導細胞存活、增殖及分化能力的前提下,提高小鼠T細胞、HSCs和人HSCs的慢病毒轉(zhuǎn)導效率。為提供更好的服務(wù),上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司代理的SIRION Biotech GmbH品牌現(xiàn)已正式變更為Revvity Gene Delivery GmbH。我司仍將作為Revvity Gene Delivery在中國區(qū)域LentiBOOST產(chǎn)品業(yè)務(wù)的Exclusive Distributor,LentiBOOST在中國市場的營銷和技術(shù)支持工作仍將由上海曼博生物負責。淺談慢病毒轉(zhuǎn)導現(xiàn)狀慢病毒轉(zhuǎn)染相關(guān)的實驗。
為了達到研究目的,在轉(zhuǎn)導過程中加入轉(zhuǎn)導增強劑也能有效提高轉(zhuǎn)導效率。目前根據(jù)轉(zhuǎn)導增強劑的作用機制可分為兩大類:入胞增強子和入胞后增強子。入胞增強子作用于病毒的附著或進入過程,通過在物理上增加病毒載體顆粒和靶細胞之間的共定位或降低它們之間的排斥力發(fā)揮作用。而入胞后增強子是在病毒進入細胞后發(fā)揮作用,降低細胞質(zhì)中運輸阻礙,Zui終獲得更高的轉(zhuǎn)導細胞比例并提高細胞內(nèi)VCN。基因zhi liao的臨床效果取決于細胞的高水平轉(zhuǎn)導,雖可通過二次轉(zhuǎn)導或提高gan ran復數(shù)(multiplicityofinfection,MOI)增加轉(zhuǎn)導率,但延長體外培養(yǎng)時間可誘導干細胞進入細胞周期而影響其分化增殖能力;提高gan ran復數(shù)會提高插入突變風險和增加生產(chǎn)成本。
慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果。在gan ran能力方面可有效地gan ran神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,從而達到良好的的基因zhi liao效果。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細胞,如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等,使用慢病毒載體,能da da提高目的基因的轉(zhuǎn)導效率,且目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率da da增加,能夠比較方便快捷地實現(xiàn)目的基因的長期、穩(wěn)定表達。LentiBOOST是德國Sirion Biotech開發(fā)的一種高效、無細胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導增強劑,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉(zhuǎn)導。更多關(guān)于LentiBOOST慢病毒轉(zhuǎn)導的相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!慢病毒載體是一種源于人類免疫缺陷病毒的基因載體。
研究發(fā)現(xiàn) LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白的組合使用可以產(chǎn)生比polybrene更高的轉(zhuǎn)導效率,且對細胞活力或干細胞特性沒有劑量依賴性的不良影響。這種轉(zhuǎn)導增強劑的組合dai biao了一種有價值的臨床兼容性polybrene替代方案,具有顯著提高基因zhi liao應(yīng)用中 MSCs 慢病毒轉(zhuǎn)導效率的潛力。細胞狀態(tài)對于慢病毒轉(zhuǎn)導效率也具有很大的影響,良好的生長狀態(tài)是達到高gan ran效率的保證,一般選擇細胞形態(tài)較好、輪廓清晰、處于對數(shù)生長期的細胞進行g(shù)an ran可提高gan ran效率。更多關(guān)于LentiBOOST相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號查看更多技術(shù)文章:Mine-bio可以增加慢病毒轉(zhuǎn)染的速度的試劑是什么?增強慢病毒轉(zhuǎn)導滴度
新合成的逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA整合到宿主DNA中,稱為原病毒。制備慢病毒轉(zhuǎn)導protocol
研究發(fā)現(xiàn) LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白的組合使用可以產(chǎn)生比polybrene更高的轉(zhuǎn)導效率,且對細胞活力或干細胞特性沒有劑量依賴性的不良影響。這種轉(zhuǎn)導增強劑的組合dai biao了一種有價值的臨床兼容性polybrene替代方案,具有顯著提高基因zhi liao應(yīng)用中 MSCs 慢病毒轉(zhuǎn)導效率的潛力。細胞狀態(tài)對于慢病毒轉(zhuǎn)導效率也具有很大的影響,良好的生長狀態(tài)是達到高gan ran效率的保證,一般選擇細胞形態(tài)較好、輪廓清晰、處于對數(shù)生長期的細胞進行g(shù)an ran可提高gan ran效率。更多關(guān)于Sirion Biotech LentiBOOST相關(guān)技術(shù)文章,歡迎咨詢上海曼博生物!也可關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio制備慢病毒轉(zhuǎn)導protocol