為什么要做支原體檢測?支原體是蕞小和蕞簡單的自我復(fù)制生命體。由于支原體體積?。?00nm),缺乏剛性的細(xì)胞壁,因此肉眼無法檢測到支原體,它們可以透過0.2μm的標(biāo)準(zhǔn)過濾膜,并對很多抗 生素都具有抵抗力。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個主要問題,不止影響實驗結(jié)果的有效性,更會影響細(xì)胞工程制藥的質(zhì)量和安全性。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,支原體感 染發(fā)生率達到63%,因而細(xì)胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。當(dāng)細(xì)胞(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染后,細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變,而細(xì)胞的生長率一般并未發(fā)生明顯的影響,因而細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。南京正揚的支原體檢測試劑盒能提供性能驗證報告嗎?鄭州qPCR法支原體檢測優(yōu)點
隨著我國生物藥以及細(xì)胞治 療相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,相關(guān)的法律法規(guī)也在不斷健全。支原體檢測就是其中必不可少的一項。準(zhǔn)確進行支原體檢測,是避免外源因子污染,保證產(chǎn)品質(zhì)量的重要質(zhì)控手段。根據(jù)我國藥典的相關(guān)規(guī)定,如下領(lǐng)域需要進行支原體檢測:主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批、對照細(xì)胞以及臨床治 療、生產(chǎn)終末細(xì)胞、檢定細(xì)胞、病毒種子批和病毒類疫苗的病毒收獲液以及原液等。另外,其他一些規(guī)定、指導(dǎo)意見中,細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)材料如培養(yǎng)基、胰酶、臨床治 療用干細(xì)胞和免疫細(xì)胞、新生牛血清以及雜交瘤細(xì)胞等也需要進行檢測。合肥豬鼻支原體檢測產(chǎn)品快速支原體檢測試劑盒有哪些?
用qPCR法進行支原體檢測時,出現(xiàn)擴增曲線復(fù)孔間熒光信號值降低及復(fù)孔間擴增曲線重復(fù)性差的原因可能是什么?復(fù)孔間部分曲線熒光信號值降低的現(xiàn)象比較常見,通常與反應(yīng)管內(nèi)存在氣泡相關(guān),隨反應(yīng)溫度升高,氣泡破裂導(dǎo)致熒光信號值降低。上機前需仔細(xì)檢查反應(yīng)管內(nèi)是否有氣泡殘留。另外,針對加樣誤差引起的復(fù)孔間重復(fù)性差,實驗人員上崗前需加強培訓(xùn)并考核,移液器務(wù)必定期校準(zhǔn)并正確掌握使用方法。此外,還需注意確保試劑與樣品混勻,離心后再上機。
如今,實時熒光定量PCR(qPCR)是一種首 選的支原體檢測方法,因為它準(zhǔn)確、靈敏且省時。與常規(guī)PCR不同,qPCR允許實時觀察支原體DNA的DNA擴增,因為特異性引物在熒光探針存在的情況下與其靶序列結(jié)合,從而導(dǎo)致DNA擴增和熒光增強。此外,qPCR比常規(guī)PCR更具特異性和敏感性。與標(biāo)準(zhǔn)PCR一樣,支原體qPCR需要內(nèi)部、陽性和陰性對照,并且可能受到實驗室支原體DNA污染的影響。為什么我們需要敏感的支原體檢測?細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞系的使用在生物研究和生物制藥產(chǎn)品的生產(chǎn)中是必不可少的。當(dāng)發(fā)生支原體感 染時,后果——感 染的疫苗、代價高昂的藥物開發(fā)中斷、不可靠的細(xì)胞培養(yǎng)試驗、不可重復(fù)的結(jié)果、失去多年的工作、失去寶貴的細(xì)胞系——可能是毀滅性的。此外,支原體對細(xì)胞培養(yǎng)中常用的抗 生素不敏感。因此,必須每月以蕞靈敏和蕞可靠的方法對細(xì)胞系進行支原體的常規(guī)檢測。支原體檢測方法是否正確?
日本藥典JPXVⅢ〈G3-14-170〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關(guān)性能驗證的要求,包括檢測限(LOD)、專屬性、耐用性、可比性。其中對于可比性的描述及要求如下:可比性研究主要包括核酸擴增法與方法A和/或方法B的檢測限的對比。此外,專屬性(多種的支原體檢測,假定的假陽性結(jié)果)也應(yīng)該在對比中。檢測限的可接受標(biāo)準(zhǔn)如下:如果用于取代方法A(培養(yǎng)法),核酸擴增系統(tǒng)應(yīng)能檢測到10CFU/ml。如果用于取代方法B(指示細(xì)胞培養(yǎng)法),核酸擴增系統(tǒng)應(yīng)能檢測到100CFU/ml。針對這兩種情況,都應(yīng)使用合適的標(biāo)準(zhǔn)品以校準(zhǔn)CFU數(shù),以確定能達到這些標(biāo)準(zhǔn)。支原體檢測哪家公司專業(yè)。泰州支原體檢測原理
南京正揚的支原體檢測試劑盒能檢測哪些支原體型別?鄭州qPCR法支原體檢測優(yōu)點
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機環(huán)節(jié)有哪些注意事項?①實驗時應(yīng)注意防止外源DNA對試劑的污染,先加樣品DNA,然后進行陽性質(zhì)控品的操作。在制備反應(yīng)試劑和添加DNA模板時,使用帶濾芯的搶頭,添加不同的試劑和不同的樣本時需更換搶頭,并經(jīng)常更換手套;②PCR實驗室應(yīng)具有3個不同的分區(qū),分別為試劑準(zhǔn)備間、樣本制備間、擴增間。3個分區(qū)應(yīng)存在壓力差,試劑準(zhǔn)備間>樣本制備間>擴增間;鄭州qPCR法支原體檢測優(yōu)點