宿主細(xì)胞殘留DNA是指可能出現(xiàn)于生物制品中由宿主組織細(xì)胞產(chǎn)生的DNA片段或更長分子。目前，生物制品常用宿主包括：哺乳動物細(xì)胞系中的幼倉鼠腎細(xì)胞系、中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)、小鼠骨髓瘤NS0細(xì)胞系、人胚腎細(xì)胞系(HEK-293)、酵母菌和大腸桿菌等。重組蛋白藥、抗體藥、疫苗等生物制品由連續(xù)傳代的微生物或動物細(xì)胞生產(chǎn)，雖然經(jīng)過復(fù)雜的純化工藝，但產(chǎn)品中仍可能有宿主細(xì)胞殘留DNA。殘留的宿主細(xì)胞DNA一般有相同的基本結(jié)構(gòu)單位，但存在的長度和形式各異，它們均可導(dǎo)致傳染性、致ai性、免疫原性和突變性等風(fēng)險；鑒于上述風(fēng)險，國內(nèi)外監(jiān)管部門分別出臺了相應(yīng)的指導(dǎo)原則并提供了宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的方法。美國FDA對Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求。寧波E.coli殘留DNA檢測價格

E.coli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測在mRNA藥物生產(chǎn)中的應(yīng)用。mRNA藥物的制備流程包括模板DNA制備、mRNA原液制備和成品制備，其中DNA原液的制備過程中，需借助大腸桿菌作為宿主細(xì)胞擴(kuò)增質(zhì)粒DNA，線性化的質(zhì)粒DNA作為體外轉(zhuǎn)錄（IVT）的模板，因此，模板DNA中可能有宿主細(xì)胞DNA的殘留、mRNA原液可能存在質(zhì)粒DNA模板的殘留，可能引發(fā)藥物安全性問題。為監(jiān)測生物制品的生產(chǎn)工藝，確保其質(zhì)量穩(wěn)定性和安全性，國內(nèi)外監(jiān)管機(jī)構(gòu)建立了生物制品殘留DNA的檢測標(biāo)準(zhǔn)和檢測方法。上海Vero細(xì)胞殘留DNA檢測Ecoli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的質(zhì)量控制。

實(shí)時熒光定量PCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的原理和方法：實(shí)時熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號指示，通過實(shí)時監(jiān)控PCR體系中的熒光信號，對樣本中初始模板進(jìn)行定量分析。實(shí)時熒光定量PCR可實(shí)時檢測產(chǎn)物的生成量，通過加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達(dá)到檢測宿主細(xì)胞殘留DNA含量的目的。

為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測?眾所周知，大部分生物制劑是不經(jīng)過胃腸道直接進(jìn)入體內(nèi)，所以除了生物活性外，相關(guān)部門對藥品中雜質(zhì)的含量要求非常嚴(yán)格。其中，宿主細(xì)胞殘留DNA因?yàn)榫哂刑貏e的潛在安全風(fēng)險，一直是監(jiān)管機(jī)構(gòu)關(guān)注的重點(diǎn)。生物制品中的重組蛋白藥、抗體藥、疫苗等產(chǎn)品是用連續(xù)傳代的動物細(xì)胞株表達(dá)生產(chǎn)，雖然經(jīng)過嚴(yán)格的純化工藝，但產(chǎn)品中仍有可能殘余宿主細(xì)胞DNA。這些殘余DNA可能帶來傳染性或致瘤性風(fēng)險，比如殘留DNA可能攜帶HIV病毒或Ras  ai基因。

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒在重組蛋白類醫(yī)療器械領(lǐng)域的應(yīng)用。已經(jīng)實(shí)施的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T1888-2023《重組人源化膠原蛋白》中加強(qiáng)了對重組蛋白類醫(yī)療器械的質(zhì)量控制。重組蛋白類醫(yī)療器械產(chǎn)品是利用基因重組技術(shù)，通過工程菌或工程細(xì)胞如：E.coli、酵母、CHO細(xì)胞等發(fā)酵表達(dá)生產(chǎn)目的蛋白。與動物源產(chǎn)品相比減少外源病毒的隱患，同時降低免疫原性的風(fēng)險。新的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對于產(chǎn)品中易產(chǎn)生基因毒性及免疫原性的外源性DNA、宿主細(xì)胞蛋白、抗生su的殘留量提出了明確的檢測要求。做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒的公司有哪些？

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測與重組人源化膠原蛋白行業(yè)：①外源性DNA：作為醫(yī)療器械使用的原材料,宜根據(jù)預(yù)期臨床用途(作為植入物體內(nèi)使用,還是作為敷料等體表、黏膜使用)、使用量等,確定外源性DNA殘留量限值。如含重組人源化膠原蛋白的產(chǎn)品預(yù)期為體內(nèi)植人劑,推薦參考生物制品外源性DNA殘留限量要求,結(jié)合殘留DNA宿主類型及其風(fēng)險程度設(shè)定每人每次最大使用量限值。②宿主細(xì)胞蛋白殘留：E.coli、酵母、CHO蛋白質(zhì)殘留應(yīng)≤0.05%(體內(nèi)植人),或≤0.1%(外用)。③殘余抗生su含量：應(yīng)≤50ng/mg。④微生物限度：如以非無菌的方式提供,每1g.每1mL或每10cm2需氧菌總數(shù)應(yīng)≤102CFU,霉菌和酵母菌菌落數(shù)應(yīng)≤10CFU,不應(yīng)檢出大腸埃希菌.金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測定量分析。合肥正揚(yáng)生物HEK293細(xì)胞殘留DNA檢測注意事項(xiàng)

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