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磁珠法核酸提取常見問題之磁珠結(jié)塊:導(dǎo)致磁珠結(jié)塊的可能原因:①磁珠吸附了過多雜質(zhì),包括蛋白、脂質(zhì)、多糖等;②磁珠粒徑太小;③洗滌完畢,乙醇干燥時間過長。④磁珠磁吸附時間過長;⑤操作中途含磁珠的樣品管離心速率過高、離心時間過長;磁珠結(jié)塊的解決辦法:①優(yōu)化裂解液、結(jié)合液配方,將雜質(zhì)裂解并充分消化;②選擇粒徑較大的微球;③縮短干燥時間;④控制磁珠吸附時間,磁分離時,待液體變澄清即可將液體吸棄,并及時將EP管從磁力架上取出;⑤操作過程中切勿高速或長時間離心;南京正揚的支原體核酸提取試劑盒有哪些優(yōu)勢?上海rcAAV核酸提取價格
磁珠法核酸提取常見問題之核酸得率低:核酸得率低的可能原因:①磁珠吸附能力較弱,只能結(jié)合溶液中少量的核酸;②磁珠洗脫方法不正確導(dǎo)致核酸洗脫效率較弱;③所使用的提取試劑(pH、鹽、醇)與該磁珠不匹配;④樣品對所用提取試劑有抑制;核酸得率低的解決辦法:①改變表面基團種類及密度;②減少洗脫前的干燥時間;③洗脫時將樣品至于56℃孵育,加熱促進核酸洗脫;④優(yōu)化試劑配方,使配方與所選磁珠相匹配;④更換與提取試劑匹配的磁珠;鄭州正揚生物支原體DNA提取廠家HEK293細胞殘留核酸提取。
核酸提取時,加標(biāo)回收率的定義及注意事項:加標(biāo)回收率是指在測定樣品的同時,于同一樣品的子樣中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進行測定,將其測定結(jié)果扣除樣品的測定值,以計算回收率。加標(biāo)回收設(shè)置的注意事項:①同一樣品的子樣取樣體積必須相等;②各類子樣的測定過程必須按相同的操作步驟進行。③加標(biāo)量不能過大,一般為待測物含量的0.5~2.0倍,且加標(biāo)后的總含量不應(yīng)超過方法的測定上限。④加標(biāo)物的濃度宜較高,加標(biāo)物的體積應(yīng)很小,一般以不超過原始試樣體積的1%為好。
磁珠法核酸提取一般可以分為四步:裂解——結(jié)合——洗滌——洗脫裂解:核酸必須從細胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來,細胞裂解可通過機械作用、化學(xué)作用、酶作用等方法實現(xiàn)。其中,酶作用主要是通過加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或鏈霉蛋白酶)以使細胞破裂,核酸釋放。蛋白酶還能降解與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì),促進核酸的分離。結(jié)合:磁珠表面帶負電荷,磁珠buffer是高鹽環(huán)境有帶正電荷的鹽離子,樣本被buffer影響,磷酸基團帶負電荷。南京正揚生物自主研發(fā)的核酸提取試劑有哪些?
磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)--樣品取用越多,提取效果越好在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下,往往核酸提取效果不好,很多老師就會采用多取樣本的方式增加核酸提取量。但簡單地增加樣本取樣量,有時會引入過多的雜質(zhì),超出裂解液裂解能力,也會使提取效率降低,所以并不推薦通過簡單的增加樣本取樣量的方式來達到增加提取量的目的。如果確實是由于樣本量不足而引起的提取量過低,建議在前處理先經(jīng)過富集或者濃縮步驟再開始提取。或者增加裂解的完全性,使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。磁珠法核酸提取試劑盒的優(yōu)點有哪些?鄭州復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒核酸提取廠家
南京正揚自主研發(fā)的核酸提取試劑盒是用磁珠法提取嗎?上海rcAAV核酸提取價格
隨著疫 情相關(guān)信息的傳播,許多先前不為大眾所知的診斷行業(yè)專業(yè)名詞逐漸變得家喻戶曉,如核酸檢測、試劑盒、咽拭子、假陰性等等。我們在進行核酸檢測的時候,通常需要在檢測之前經(jīng)歷核酸提取這一步驟,簡單來說就是將病毒的核酸從我們采集的樣本當(dāng)中提取出來,以用于后續(xù)實驗。通過對磁珠進行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),從而可以實現(xiàn)對核酸的高通量、自動化提取,這一技術(shù)產(chǎn)生于20世紀(jì)80年代,已經(jīng)有了成熟的試劑盒并形成為產(chǎn)業(yè)。上海rcAAV核酸提取價格