復(fù)制性慢病毒/復(fù)制性逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的必要性：RCL/RCR會同逆轉(zhuǎn)錄病毒載體一樣，整合在細(xì)胞基因組中，從而產(chǎn)生因整合導(dǎo)致的原ai基因激  活，抑ai基因破壞或者使促細(xì)胞生長的因子高度表達(dá)而造成二次仲瘤的風(fēng)險。因其具有復(fù)制性，即產(chǎn)生具有復(fù)制能力的病毒，增加了因整合而造成的二次仲瘤的風(fēng)險。雖然目前在病毒制備體系方面改進(jìn)很多，很大程度上降低了RCL/RCR產(chǎn)生的風(fēng)險，但是仍不能完全排除，美國FDA要求對于γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體，需要在整個生產(chǎn)過程及不同階段進(jìn)行RCL/RCR檢測，需要對載體生產(chǎn)用主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、生產(chǎn)終末細(xì)胞、載體上清液及在體外培養(yǎng)超過4天的載體轉(zhuǎn)到細(xì)胞進(jìn)行檢測，南京正揚(yáng)生物開發(fā)的重組腺相關(guān)病毒檢測試劑盒的靈敏度是多少？泰州復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測公司

基于細(xì)胞培養(yǎng)法和qPCR快檢法都能實(shí)現(xiàn)對重組腺相關(guān)病毒載體(rAAV)中復(fù)制型腺相關(guān)病毒(rcAAV)的污染率的檢測，但兩者在實(shí)際檢測中都存在檢測值不夠準(zhǔn)確的風(fēng)險（基于細(xì)胞培養(yǎng)法存在低于實(shí)際值的風(fēng)險qPCR快檢法存在高于實(shí)際值的風(fēng)險）。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制性腺相關(guān)病毒檢測試劑盒（PCR熒光探針法）是一款既適用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對rcAAV的檢測，也適用于對rcAAV的直接檢測的試劑盒，可達(dá)到兩種方法間相互驗證、相互補(bǔ)充的目的。試劑盒中Reference基因和Target基因包含在同一定量參考品中可同時實(shí)現(xiàn)對rAAV載體和rcAAV濃度快速、靈敏、特異性的定量檢測。鄭州rcAAV病毒檢測復(fù)制型病毒檢測試劑盒適用性樣品有哪些？

rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測過程中，qPCR反應(yīng)體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項？①qPCR的整個操作要低溫環(huán)境進(jìn)行，防止模板的降解，試劑避免反復(fù)凍融。②配制反應(yīng)體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應(yīng)體系要統(tǒng)一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時候考慮到操作或耗材帶來的損耗需要多配若干個反應(yīng)所需體系。③添加模板的時候注意搶頭要排盡，不求快，平行加樣。加樣后要進(jìn)行離心，將液體集中在管底，離心后注意觀察反應(yīng)體系液面是否平整，氣泡是否排盡。④每個樣品建議做3個復(fù)孔，每次除了樣品以外還要加陽性對照和陰性對照。

CAR-T細(xì)胞的微生物安全風(fēng)險可能涉及細(xì)菌、真   菌、支原體、外來病毒和來自載體生產(chǎn)的具有復(fù)制能力的病毒的污染。微生物安全問題需要高度關(guān)注，因為在生產(chǎn)過程中很容易發(fā)生微生物污染，而且蕞終的細(xì)胞產(chǎn)品無法凈化。CAR-T細(xì)胞的微生物安全主要通過對生產(chǎn)材料的嚴(yán)格檢測、按照CGMP要求嚴(yán)格控制生產(chǎn)過程、對產(chǎn)品進(jìn)行微生物檢測來保證，檢測內(nèi)容包括無菌檢測、支原體檢查、可復(fù)制型病毒檢測、微生物檢測。南京正揚(yáng)生物目前可提供支原體快檢和可復(fù)制型病毒檢測相關(guān)產(chǎn)品。qPCR法復(fù)制型慢病毒檢測的優(yōu)點(diǎn)有哪些？

用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測時，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設(shè)置不當(dāng)可能引起標(biāo)曲參數(shù)或檢測結(jié)果異常。如擴(kuò)增曲線信號蕞早出現(xiàn)在14個循環(huán)左右，基線卻設(shè)置為3-15，導(dǎo)致儀器將14個循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號默認(rèn)為基線部分，出現(xiàn)結(jié)果異常。建議將BaselineEnd設(shè)置為擴(kuò)增信號出現(xiàn)的前一個循環(huán)，或由軟件自動設(shè)置。②擴(kuò)增曲線飄起：該現(xiàn)象通常出現(xiàn)于高濃度模板情況下，擴(kuò)增曲線Ct值在10以內(nèi)的樣品。針對此類樣品檢測，設(shè)置標(biāo)曲時建議盡量控制標(biāo)曲蕞高濃度Ct值控制在10以上。檢測樣品時建議對樣品進(jìn)行稀釋后再測試。為什么要做復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測？南京復(fù)制型病毒檢測操作流程

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