根據(jù)FDA2006年發(fā)布的關于RCR復制型逆轉錄病毒檢測的指南和2018年新更新的檢測指南征求意見稿，目前RCR復制型逆轉錄病毒／RCL復制型慢病毒檢測的金標準是共培養(yǎng)法，即將測試樣品(病毒載體上清液、生產(chǎn)終末細胞、體外轉導細胞等)與允許細胞系進行共培養(yǎng)，至少5次傳代以擴增任何潛在的RCR復制型逆轉錄病毒／RCL復制型慢病毒，然后在指示階段，通過檢測特異性核酸、蛋白的方法進行測定，qPCR/RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，是RCR/RCL檢測的優(yōu) 選方法。南京正揚有復制型逆轉錄病毒檢測試劑盒的裝量是多少？蘇州rcAAV病毒檢測產(chǎn)品
復制型病毒/病毒載體回復突變（ReplicationCompetentVirus,RCV），可產(chǎn)生于病毒載體制造過程中的所有步驟當中。并且，RCV感 染宿主細胞后能隨宿主細胞在培養(yǎng)液中增殖、擴增對人體健康具有嚴重的隱患，是免疫細胞治 療類產(chǎn)品，如CAR-T產(chǎn)品的主要安全性風險之一。近年來，CAR-T細胞制備過程中，伴隨載體的不斷升級優(yōu)化，重組產(chǎn)生的復制型逆轉錄病毒/慢病毒(ReplicationCompetentRetrovirus/Lentivirus,RCR/RCL)逐漸降低，但產(chǎn)生RCR/RCL的風險隱患至今仍不能完全排除。由2022年5月發(fā)布的《體外基因修飾系統(tǒng)藥學研究與評價技術指導原則（試行）》指出RCR/RCL檢測作為安全性檢測在細胞藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過程中至關重要，相關產(chǎn)品不得檢出RCR/RCL，可知病毒載體相關產(chǎn)品中，RCR/RCL病毒檢測至關重要。蘇州RT-PCR法病毒檢測優(yōu)缺點復制型腺相關病毒檢測。
用qPCR進行rcAAV復制型腺相關病毒檢測時，哪些因素會對檢測結果準確性和方法靈敏度存在較大影響？①qPCR引物探針的序列特異性：為保證方法高靈敏度和檢出率，用于qPCR檢測的特異序列必須是存在于高度保守區(qū)域內(nèi)的穩(wěn)定序列，并且需要散布在基因組上，保證不會因工藝導致的殘留偏好而引起漏檢。②qPCR實驗室能力驗證：為滿足檢測要求，應對實驗室硬件和軟件能力進行確認。實驗室設計應按實驗流程分區(qū)操作，每個操作區(qū)域配置相應設施、設備及耗材，建立實驗室質(zhì)量管理體系，考核實驗人員的操作能力及數(shù)據(jù)分析解讀能力等。
qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養(yǎng)法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細胞產(chǎn)品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細胞采用基于細胞培養(yǎng)方法測定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測法快速放行。qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養(yǎng)法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細胞產(chǎn)品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細胞采用基于細胞培養(yǎng)方法測定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測法快速放行。。復制型慢病毒檢測要求有哪些？
《中國藥典》2020版三部《人用基因醫(yī)治制品總論》以及CDE發(fā)布的細胞基因醫(yī)治相關的技術指導原則中均提到，在設計為復制缺陷型或條件復制型載體的情況下，應分析是否存在殘留的復制型或野生型載體及其水平。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復制性腺相關病毒檢測試劑盒，可同時分別精確測定樣品中高濃度的目標載體和低濃度的復制型載體濃度，從而有效地提高了方法靈敏度，滿足法規(guī)要求的無復制型腺相關病毒（rcAAV）的污染，可用于GMP生產(chǎn)的rAAV質(zhì)量控制。南京正揚有復制型腺相關病毒檢測試劑盒嗎？合肥復制型病毒檢測特點
南京正揚有復制型慢病毒檢測試劑盒性能如何？蘇州rcAAV病毒檢測產(chǎn)品
《CAR-T細胞治 療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測方法主要有指示細胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應）和轉錄酶活性測定法(PERT)等。其中，利用指示細胞培養(yǎng)法對生產(chǎn)過程中的病毒（上清液、病毒生產(chǎn)終末期細胞）存在的RCL進行培養(yǎng)擴增，并在培養(yǎng)終點進行重復檢測是FDA推薦的RCL檢測方法。
《CAR-T細胞治 療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測方法主要有指示細胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應）和轉錄酶活性測定法(PERT)等。其中，利用指示細胞培養(yǎng)法對生產(chǎn)過程中的病毒（上清液、病毒生產(chǎn)終末期細胞）存在的RCL進行培養(yǎng)擴增，并在培養(yǎng)終點進行重復檢測是FDA推薦的RCL檢測方法。 蘇州rcAAV病毒檢測產(chǎn)品