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做外泌體鑒定

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-02-19

外泌體的分離對(duì)于理解它們的作用機(jī)制和它們?cè)谏镝t(yī)學(xué)科學(xué)中的應(yīng)用是至關(guān)重要的。一些實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)成功地利用諸如超離心法、超濾法、層析法、基于聚合物的沉淀法和抗體偶聯(lián)磁珠的親和捕獲等技術(shù)分離外泌體。已有研究表明,密度梯度離心法可以分離出比較純凈的外泌體。1983年外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而比較近幾年,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣。比較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用。翌科生物的外泌體做的怎么樣?做外泌體鑒定

外泌體的產(chǎn)生過程為:細(xì)胞膜內(nèi)陷,形成內(nèi)體(endosome),再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),比較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體比較早見于1981年,EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡,并命名為exosome。對(duì)于外泌體的作用,當(dāng)時(shí)推測(cè)為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會(huì)分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗**反應(yīng)。2007年HValadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來(lái)越多,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、**生長(zhǎng)于侵襲等各種生物過程中。全自動(dòng)藥物外泌體提取試劑盒值得推薦的外泌體研究公司。

翌科生物團(tuán)隊(duì)專注于外泌體研究,公司擁有成熟的外泌體研發(fā)經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)服務(wù)平臺(tái),具備全套的外泌體提取、鑒定、分析試劑與服務(wù)。外泌體(exosome)是一群由細(xì)胞分泌的直徑在40-150 nm左右、密度范圍為1.09-1.18 g/ml的具有雙層磷脂膜結(jié)構(gòu)的囊泡樣物質(zhì),包含蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA及其它信號(hào)分子(圖1)。目前的研究發(fā)現(xiàn),各個(gè)細(xì)胞類型(如腫瘤細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨核細(xì)胞等)均有分泌外泌體的能力,并且外泌體也被發(fā)現(xiàn)存在于人體的各種體液(如血液、唾液、尿液、乳汁等)。體液中的外泌體及其內(nèi)含物被認(rèn)為可作為包括zhong瘤在內(nèi)的多種疾病的生物標(biāo)志物,廣泛應(yīng)用于疾病診斷,具有巨大的科研價(jià)值和臨床應(yīng)用前景。

外泌體膜染料:PKH67、PKH26

組成:方法一:外泌體直接染色1.適量(10ug,BCA法測(cè)量)外泌體溶于500ulDiluentC中(可以用DPBS代替);2.適量的PKH26(10ug外泌體推薦用量不超過1ul)染料溶于等體積的DiluentC中(可以用DPBS代替),溫和吹打混勻;3.將步驟2中的溶液加入1中并迅速吹打混勻。4.避光,室溫靜置孵育5-10min;5.加入等體積(2ml)的血清(exosomefree),或者1%BSA終止染色反應(yīng);6.使用超濾/超離方式洗凈未與外泌體結(jié)合的PKH26染料。方法二:通過細(xì)胞染色間接對(duì)外泌體染色1.2×107細(xì)胞500g,5min離心,盡量棄去上清。2.加入1mlDiluentC,溫和吹打混勻。3.將4ulPKH26儲(chǔ)存液加入1mlDiluentC中(可以用DPBS代替),溫和吹打混勻;4.將步驟2中制備的細(xì)胞懸液加入步驟3中的制備的PKH26工作液,快速吹打混勻后室溫靜置孵育5min;5.加入等體積(2ml)的血清(exosomefree),或者1%BSA終止染色反應(yīng);6.使用超濾/超離方式洗凈未與外泌體結(jié)合的PKH26染料。注意:染色后的外泌體請(qǐng)立即使用或儲(chǔ)存于-80℃ 翌科生物有自己做外泌體研究的實(shí)驗(yàn)室嗎?

外泌體提取,PEG-base沉淀法,聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。通過差速超速離心法(DifferentialUltracentrifugation)從細(xì)胞培養(yǎng)基上清或血漿血清中提取外泌體。外泌體提取找哪個(gè)公司做?比較好?廣州做外泌體

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外泌體是細(xì)胞的外膜囊泡,是細(xì)胞外納米級(jí)膜囊泡的一個(gè)子集,直徑為30-150nm。根據(jù)其釋放機(jī)制和大小,EVs分為以下三種類型:外泌體(直徑小于150nm)、MVs/脫落顆粒(100~1000nm)和凋亡小體(500~4000nm)。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,包括免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和干細(xì)胞等。外泌體成分取決于來(lái)源、宿主健康和細(xì)胞外刺激。外泌體成分可以從原細(xì)胞轉(zhuǎn)移到靶細(xì)胞。外泌體中包含多種細(xì)胞成分,包括mRNA、miRNAs、HSP90和HSP70等等。做外泌體鑒定

南京翌科生物科技有限公司位于仙林街道緯地路9號(hào)江蘇生命科技園F7棟301-3室。公司業(yè)務(wù)分為外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)染試劑等,目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn),為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司秉持誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念,在商務(wù)服務(wù)深耕多年,以技術(shù)為先導(dǎo),以自主產(chǎn)品為重點(diǎn),發(fā)揮人才優(yōu)勢(shì),打造商務(wù)服務(wù)良好品牌。翌科生物立足于全國(guó)市場(chǎng),依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力,融合前沿的技術(shù)理念,飛快響應(yīng)客戶的變化需求。