在細(xì)胞體外培養(yǎng)工作中,為了達(dá)到長(zhǎng)期保存細(xì)胞的生物活性的目的,須將細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存,并在實(shí)驗(yàn)需要的時(shí)候?qū)⑵渲匦聫?fù)蘇和培養(yǎng)。目前,細(xì)胞凍存**常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用添加適量保護(hù)劑使細(xì)胞緩慢降溫至指定溫度范圍,從而到達(dá)保護(hù)細(xì)胞的目的。EKBIOTech無(wú)血清細(xì)胞凍存液是EKBIO技術(shù)團(tuán)隊(duì)在長(zhǎng)期的細(xì)胞研究過(guò)程中針對(duì)細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,面向數(shù)百種細(xì)胞研發(fā)出的**凍存液產(chǎn)品。該產(chǎn)品添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑,可延緩細(xì)胞在凍存過(guò)程中的沉降速率,防止細(xì)胞互相擠壓,影響細(xì)胞凍存效果。另外,添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑、滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑,這些成分在溶液中同水分子結(jié)合,發(fā)生水合作用,弱化水的結(jié)晶過(guò)程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成,能**降低細(xì)胞在凍存過(guò)程中冰晶對(duì)于細(xì)胞的損傷,有效提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率。該產(chǎn)品配方成分明確,不含血清、不含動(dòng)物源性蛋白,可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細(xì)胞的安全;不僅適用于常規(guī)細(xì)胞系、原代細(xì)胞,同時(shí)亦適合于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。與傳統(tǒng)凍存液相比,無(wú)需繁瑣費(fèi)時(shí)的程序凍存步驟或價(jià)格高昂的程序降溫儀,可直接重懸細(xì)胞后置于-80℃。無(wú)血清細(xì)胞凍存液成分。徐州凍存細(xì)胞凍存液使用說(shuō)明
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域:,尤其涉及一種細(xì)胞凍存液,具體涉及一種用于干細(xì)胞的凍存液。背景技術(shù)::臍帶血是胎兒娩出、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液,通常是廢棄不用的。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn),臍帶血中含有可以重建人體造血和免疫系統(tǒng)的造血干細(xì)胞,可用于造血干細(xì)胞移植,***80多種疾病。因此,臍帶血已成為造血干細(xì)胞的重要來(lái)源,特別是無(wú)血緣關(guān)系造血干細(xì)胞的來(lái)源。也是一種非常重要的人類生物資源。干細(xì)胞***是將具有不斷自我繁殖能力和多向化潛能的干細(xì)胞在體外培養(yǎng)后,再將其移植入患者受損或缺損組織中,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)損傷組織的補(bǔ)充和修復(fù)。目前干細(xì)胞采集后,需要加入保存液進(jìn)行冷凍保存,細(xì)胞凍存液是細(xì)胞凍存過(guò)程中的**試劑,關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇后的活性及數(shù)量等問(wèn)題,現(xiàn)有的細(xì)胞凍存液,一方面營(yíng)養(yǎng)成分單一,配比不當(dāng),導(dǎo)致細(xì)胞存活率低、穩(wěn)定性差;另一方面大多都是異種血清,會(huì)引入外源蛋白從而增加細(xì)胞污染和過(guò)敏的風(fēng)險(xiǎn),不適用于臨床。因此,為有效開展干細(xì)胞移植及建立干細(xì)胞庫(kù),亟需開發(fā)一種成本低、細(xì)胞存活率高、成分簡(jiǎn)單的細(xì)胞凍存液,對(duì)于生物醫(yī)學(xué)具有重要的研究與應(yīng)用價(jià)值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。蘇州專業(yè)做細(xì)胞凍存液應(yīng)用無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用濃度怎么樣?
無(wú)血清細(xì)胞凍存液,含多種保護(hù)劑成分。一些保護(hù)劑,易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),**提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。無(wú)血清細(xì)胞凍存液不含牛血清,無(wú)動(dòng)物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存,無(wú)需冷凍,即取即用。凍存細(xì)胞,無(wú)需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。1.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲(chǔ)存。2.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ)。3.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于其他類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的儲(chǔ)存。1.不含牛血清,無(wú)動(dòng)物源組分。傳統(tǒng)的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。胎牛血清取自牛,因此,難以應(yīng)用到需要避免接觸動(dòng)物源的應(yīng)用領(lǐng)域。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,無(wú)動(dòng)物源組分?!婕纯煞€(wěn)定保存,無(wú)需冷凍,即取即用。為了避免反復(fù)凍融,傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液,需要分裝成小管后置于-20℃環(huán)境下保存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液,2-8℃保存即可,無(wú)需再進(jìn)行分裝。在體外培養(yǎng)工作中,為了保留種子和長(zhǎng)期保存培養(yǎng)物的活性。
進(jìn)行瓶口消毒,棄去細(xì)胞原來(lái)的培養(yǎng)基。按每25cm2/ml胰酶/EDTA消化液比例加入消化液,放入顯微鏡下觀察,待所有細(xì)胞變圓后立即拿入超凈臺(tái)內(nèi),加入2ml細(xì)胞完全培養(yǎng)基以立即終止消化。采用無(wú)菌***頭輕輕吹打細(xì)胞表面,注意吹打全部培養(yǎng)表面,可以按照先左右吹打,后上下吹打的方式,取所有細(xì)胞懸液放入一干凈的15毫升離心管內(nèi)。配平離心:采用天平配平兩端,每分鐘800轉(zhuǎn),室溫離心5分鐘。采用羅氏CASY-DT快速細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。加入10mlCASY-ton至以標(biāo)記viable的管子中,加入100μl細(xì)胞懸液,顛倒混勻三次,可進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)??梢?jiàn)每毫升懸液中有活細(xì)胞總數(shù)。取出凍存管,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。離心后,以無(wú)菌吸管吸棄上清液,不要吸到底部的細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀與凍存液充分混勻,根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果,將細(xì)胞總數(shù)調(diào)節(jié)至細(xì)胞數(shù)量為每毫升有5×10?為宜。將細(xì)胞凍存懸液分裝入細(xì)胞凍存管中,一般一個(gè)兩毫升凍存管裝入1至毫升細(xì)胞凍存懸液為宜。嚴(yán)密封口后,進(jìn)行程序性降溫凍存:首先﹣4℃30分鐘,20℃30分鐘,﹣80℃過(guò)夜,**后進(jìn)行液氮保存。另有一種比較實(shí)用的降溫方法:用**少兩厘米厚的醫(yī)用棉紗將凍存管緊緊包裹,扎緊,直接放入-70℃冰箱。無(wú)血清細(xì)胞凍存液說(shuō)明書。
操作時(shí)切勿使水浸沒(méi)凍存管口,以免造成細(xì)胞污染);2)待細(xì)胞凍存管中凍存液完全融化后,立即逐滴加入少量細(xì)胞完全培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞進(jìn)行混合,再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有8~10mL該細(xì)胞完全培養(yǎng)基的試管中,輕輕混合均勻;1000r/min離心5min,棄上清;3)加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按照合適的接種密度將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)容器中,加入適量的已預(yù)熱的新鮮的細(xì)胞完全培養(yǎng)基。4)輕輕搖晃培養(yǎng)器皿,使細(xì)胞分布均勻,靜置于37℃、飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。產(chǎn)品穩(wěn)定性及保存條件1)置于2~8℃避光保存,有效期為1年;2)本產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用,超過(guò)保質(zhì)期,必須放棄使用;3)為確保產(chǎn)品質(zhì)量,請(qǐng)避免反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品。注意事項(xiàng)1)凍存細(xì)胞分裝至凍存管后,應(yīng)減少在室溫/4℃存放時(shí)間,盡快移入到-80℃超低溫冰箱;2)對(duì)于原代胚胎干細(xì)胞/iPS細(xì)胞/其它珍貴細(xì)胞樣本等凍存時(shí),我們建議您在使用前,事先對(duì)所凍存的細(xì)胞進(jìn)行至少為期1周的細(xì)胞凍存測(cè)試實(shí)驗(yàn),確認(rèn)沒(méi)問(wèn)題后再進(jìn)行正式凍存;3)本產(chǎn)品經(jīng)3次μm過(guò)濾除菌,使用本產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作,避免污染;4)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作;5)本產(chǎn)品只用于科研用途。無(wú)血清細(xì)胞凍存液運(yùn)輸要求。常州細(xì)胞復(fù)蘇細(xì)胞凍存液可以放多久
做無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪個(gè)公司好?徐州凍存細(xì)胞凍存液使用說(shuō)明
常須將培養(yǎng)物進(jìn)行冷凍保存,并在需要的時(shí)候重新復(fù)蘇和培養(yǎng)。目前,細(xì)胞凍存**常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護(hù)局的緩慢冷凍法保存細(xì)胞。無(wú)血清非程序細(xì)胞凍存液,添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑可防止或延緩細(xì)胞在凍存過(guò)程中的沉降,防止細(xì)胞互相擠壓,影響細(xì)胞凍存效果。另外添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑。滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑,它們?cè)谌芤褐型肿咏Y(jié)合,發(fā)生水合作用,弱化水的結(jié)晶過(guò)程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成,能**降低細(xì)胞在凍存過(guò)程中冰晶對(duì)于細(xì)胞的損傷,有效提高細(xì)胞復(fù)蘇率和活力。同時(shí)無(wú)任何外源血清成分,減少細(xì)胞污染機(jī)會(huì),并且無(wú)需繁瑣的程序凍存步驟,節(jié)省了大量時(shí)間和精力。內(nèi)***:<支原體:陰性微生物檢查:陰性滲透壓:280-340m0smol/kgPH:純度:>98%保存溫度:4℃避光保存有效期:24個(gè)月應(yīng)用:?干細(xì)胞儲(chǔ)存?T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的儲(chǔ)存?其他額種類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的儲(chǔ)存產(chǎn)品特性:?無(wú)需程序降溫,直接置于-80℃冰箱,后置于液氮保存?1類醫(yī)療器械生產(chǎn)許可?無(wú)血清培養(yǎng)基生產(chǎn)可用于臨床。徐州凍存細(xì)胞凍存液使用說(shuō)明
南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測(cè)試劑、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫(kù)、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實(shí)、誠(chéng)實(shí)可信的企業(yè)。翌科生物作為翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測(cè)試劑、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫(kù)、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的企業(yè)之一,為客戶提供良好的外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)染試劑。翌科生物繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長(zhǎng),又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。翌科生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)市場(chǎng),以敏銳的市場(chǎng)洞察力,實(shí)現(xiàn)與客戶的成長(zhǎng)共贏。