熒光素也就是FDAFDA可透過細胞膜并作為熒光素積蓄在活細胞內。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低,因此熒光素從細胞中滲漏的量也高。FDA也可用于流式細胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和530nm。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產生生物熒光的酶的統稱,其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內的熒光素酶。在相應化學反應中,熒光的產生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(與肌肉收縮的情況相似)。[1]熒光生成反應通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對于所有能夠產生熒光的底物和其對應的酶的統稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應。D-熒光素鉀鹽檢測是個人合作嗎?蘇州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽供應商
更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物,而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲)則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統學研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。免疫熒光法免疫熒光法的基本原理是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素,當與其相對應的抗原或抗體起反應時,在形成的復合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結合部位,檢測出抗原或抗體。常用的熒光素有①異硫氰酸熒光素(fluoreceinisothiocyante,FITC),為黃色、橙黃色或褐黃色結晶粉末,有兩種異構體,易溶于水和酒精等溶劑。分子量為389,更大吸收光譜為490~495,更大發(fā)射光譜為520~530urn,呈現明亮的黃綠色熒光,是更常用的標記抗體的熒光素。②四甲基異氰酸羅達明。蘇州游離酸D-熒光素鉀鹽活題成像原理D-熒光素鉀鹽長期保存條件是-20℃干燥避光。
其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內的熒光素酶。在相應化學反應中,熒光的產生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(與肌肉收縮的情況相似)。[1]熒光生成反應通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對于所有能夠產生熒光的底物和其對應的酶的統稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物。
2)按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應量的15mg/mL熒光素溶液;3)腹腔注射10-15min后進行成像分析。(對每只動物模型做熒光素動力學研究以確定峰值信號獲取時間)Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式:C11H8N2O3S2分子量:g/mol外觀:白色至淺黃色粉末溶解:,形成近乎無色至淺黃色的清夜保存:-15°C避光應用:1)活細胞、組織或生物體內luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析;2)***用于報告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,可溶于甲醇和DMSO;后者易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,特別適合體內實驗。配成溶液后的這三種產品,在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別。相關列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。D-熒光素鉀鹽適用于哪些領域?
每孔加入100μl養(yǎng)24h后,Luciferin使其終濃度為150μg/ml,PBS,再加入D-立即用活題成像系統檢測,分析發(fā)光強度與細胞數之間的相關性。4)細胞生長曲線繪制MCF7-luc細胞和作為對照取表達熒光素酶的MCF-7細胞,接種于24孔板,接種密度為2×104/孔。細胞接種后1~7d,每天胰蛋白酶消化其中3孔細胞,用細胞計數儀測定細胞數。以細胞生長天數為橫坐標,細胞數目為縱坐標,分別繪制兩種細胞生長曲線。二.動物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,4~5周齡,體重(15±2)g,雌雄各3只。取對數生長期的MCF-7用PBS重懸為2.5×10/ml懸液,每只裸鼠左右背側近腋部皮下接種100μl,共接種6只。接種后第5d采用德國BERTHOLD公司的活題成像系統檢測信號強度。以后每5d觀測一連續(xù)觀測30d。觀測前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉(計量為:35mg/kg體重),按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin(invivograde),10min后,進行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長情況,定量分析各時間點的熒光值。繪制腫大的瘤皮下生長曲線.MCF-7-luc細胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學觀察MCF-7-luc細胞裸鼠皮下接種后25d,脫頸處死小鼠,取腫大的瘤組織,制成石蠟切片,切片厚度為3μm。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。南通游離酸D-熒光素鉀鹽活題成像原理
D-熒光素也常用于身體的外部研究。蘇州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽供應商
luciferin)的分子結構如右圖所示:,在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應,生成氧化熒光素(oxyluciferin),分子結構如右圖所示,并產生長發(fā)生光現象。但是該底物熒光素以前大多依賴進口,產品價格昂貴。而且由于該產品容易降解、受潮影響使用效果。所以,需要國產化的方式生產,一方面可以降低成本,一方面可以增強使用效果。作者:科遠迪鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權歸作者所有。商業(yè)轉載請聯系作者獲得授權,非商業(yè)轉載請注明出處。D-luciferin,potassiumsalt熒光素產品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光,一般是將Fireflyluciferase基因(由554個氨基酸構成,約50KD)即熒光素酶基因整合到預期觀察的細胞染色體DNA上以表達熒光素酶,培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株,當細胞分裂、轉移、分化時,熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達。基因、細胞和活題動物都可被熒光素酶基因標記。將標記好的細胞接種到實驗動物體內后,當外源(腹腔或靜脈注射)給予其底物熒光素(D-luciferin,potassiumsalt,以下均簡稱熒光素),即可在幾分鐘內產生長發(fā)生光現象。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP,氧存在的條件下,催化熒光素的氧化反應才可以發(fā)光。蘇州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽供應商
南京翌科生物科技有限公司主要經營范圍是商務服務,擁有一支專業(yè)技術團隊和良好的市場口碑。公司業(yè)務分為外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測試劑,轉染試劑等,目前不斷進行創(chuàng)新和服務改進,為客戶提供良好的產品和服務。公司將不斷增強企業(yè)重點競爭力,努力學習行業(yè)知識,遵守行業(yè)規(guī)范,植根于商務服務行業(yè)的發(fā)展。翌科生物立足于全國市場,依托強大的研發(fā)實力,融合前沿的技術理念,飛快響應客戶的變化需求。