隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實驗工具領(lǐng)域推陳出新，保持技術(shù)帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)（LAR）Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報告基因一起，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外，pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報告基因上，通過生物信息學(xué)和合成方法，實現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵。此后。D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。宿遷熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商

    這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報告基因有著***的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項針對各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標(biāo)簽和一個更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合，重組為一個明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究。連云港游離酸D-熒光素鉀鹽活題成像原理D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。

    通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學(xué)，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理，并實現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外，還可以檢測底物（luciferin）濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián)，能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊的建立，一種改進(jìn)的luciferin面世，能更好地用于典型的報告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin。

    海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒提供了一種快速，靈敏的方法，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性，與海腎螢光素酶相互作用后，該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒特點：該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分。熒光素酶是生物體內(nèi)催化熒光素等物質(zhì)氧化發(fā)光的一類酶的總稱。自然界中，不同的發(fā)光生物擁有不同的熒光素酶，除了螢火蟲熒光素酶（FireflyLuciferase）之外，還有發(fā)光細(xì)菌體內(nèi)的細(xì)菌熒光素酶、發(fā)光海星的海星熒光素酶等。目前，人們對螢火蟲熒光素酶的研究**多、應(yīng)用***。一則關(guān)于手機(jī)上的細(xì)菌的新聞里，**在用ATP熒光檢測儀檢測手機(jī)表面的細(xì)菌。ATP是一種在動物、植物和細(xì)菌等活細(xì)胞中都存在的能量物質(zhì)，由前述的反應(yīng)式可知，ATP與熒光素、熒光素酶反應(yīng)發(fā)出熒光。檢測樣品中的微生物越多，ATP就越多，熒光反應(yīng)的光亮就越大。南京靠譜的D-熒光素鉀鹽測試公司。

    Q：熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時具有更寬的動態(tài)范圍，便于數(shù)值分析比較，不需要熒光顯微鏡，而且在***實驗中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進(jìn)行失蹤定位，并且其觀測不需裂解細(xì)胞，方便進(jìn)行適時觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對活性如何？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q：雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炥D(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個方面改善，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞，另外陽性對照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗證。這個實驗檢測結(jié)果很靈敏，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個數(shù)量級之內(nèi)即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性。做D-熒光素鉀鹽測試價格是多少。南京螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度

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    而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）。熒光素酶報告基因（Luc）是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶，哺乳細(xì)胞無內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細(xì)菌熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶。細(xì)菌熒光素酶對熱敏感，因此在哺乳細(xì)胞的應(yīng)用中受到限制。螢火蟲熒光素酶靈敏度高，檢測線性范圍寬達(dá)7～8個數(shù)量級，是更常用于哺乳細(xì)胞的報道基因，用熒光比色計即可檢測酶活性，因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應(yīng)用，無需裂解細(xì)胞即可檢測酶活性。Renilla熒光素酶催化腸腔（coelenterazine）氧化，產(chǎn)物可透過生物膜，可能是更適用于活細(xì)胞的報告分子。將熒光素酶報告基因載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。宿遷熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商

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