通過結果的生物學意義對結果質量進行評估?當所有具生物學意義的參數(shù)在測試中表現(xiàn)出較小的可變性時則方法學可變性亦較低方法學可變性低則結果質量就高。CASA系統(tǒng)獲得的數(shù)值與直觀評估獲得的數(shù)值進行分析和比較在精子數(shù)量和綜合運動性上具有較好的相關性而·131·中國優(yōu)生與遺傳雜志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向運動精子百分率上的相關性較低]。Holt等報道了在常規(guī)實驗條件下采用五種不同的CASA系統(tǒng)對**參數(shù)值進行比較,其結果為:采用同一個測定池由不同的操作者測定**參數(shù);變異系數(shù)(CV)是29%?活動精子比率的CV為24%?平均路徑速度(VAP)的CV為43?85%。作者們指出該分析結果不應看作是不同CASA系統(tǒng)間的工作情況的比較?實際上它揭示了操作者的錯誤是差異的主要來源。目前有待于尋找進一步的標準來評估CASA變量的結果質量。精子***的生物學功能是使卵細胞授精?因此用夫婦中的授精結果來考察精子運動性是合理的?只有在該基礎上能夠確定活動性參數(shù)的重要性。輔助生殖技術(授精IVF)的發(fā)展使檢測精子質量與各參數(shù)間的關系的比較成為可能;同樣可以驗證CASA測定結果與精子真實質量間的相關性有利于CASA結果質量的提高。精子分析系統(tǒng)較傳統(tǒng)的分析法比較,具有速度快、量比性好、準確性高、為臨床和科研提供客觀的檢測依據(jù)。南京前向運動精子分析LIN
二、生化及免疫學檢驗:1、精漿果糖測定【正常參考值】9.11-17.67mmol/L?!九R床意義】(1)精液果糖為0,可見于先天性兩側輸精管及精囊腺缺如、兩側輸精管完全阻塞或逆行**。(2)精液果糖降低,常見于精囊炎和雄***分泌不足,果糖不足可導致精子運動能量缺乏,甚至不易受孕。2、精漿酸性磷酸酶測定【正常參考值】金氏法:>255nmol·s-1/L【臨床意義】(1)精漿酸性磷酸酶含量增高,常見于前列腺肥大或早期前列腺惡性**患者。(2)精漿酸性磷酸酶含量降低,常見于前列腺炎患者。(3)精漿酸性磷酸酶檢測是法醫(yī)鑒定有無精液**敏感的方法。3、精漿頂體酶活性測定【正常參考值】36.72±21.43U/L?!九R床意義】精子頂體酶活力與精子密度及精子頂體完整率呈正相關,其活力不足,可導致男性不育。4、精漿乳酸脫氫酶-X同功酶(LDH-X)測定【正常參考值】LDH-X***活性:2620±1340U/L;LDH-X相對活性:≥0.426?!九R床意義】LDH-X具有睪丸及精子的組織特異性,是精于運動獲能的關鍵酶,該酶檢測可作為診斷男性不育有價值的指標。睪丸萎縮患者LDH-X降低或消失,精子發(fā)生缺陷時無LDH-X形成,少精或無精者可致LDH-X活性降低。服用棉酚也可抑制此酶活性。美國密度精子分析精確溫度控制該設備還支持多種分析模式,包括精子濃度、活力、形態(tài)和DNA損傷等參數(shù)的測量,滿足用戶的多樣化需求。
精液顯微鏡檢查(1)精子存活率:排精后30~60分鐘,正常精子存活率應為80%~90%,精子存活率降低是導致不育的重要原因。(2)精子活動力:指精子活動狀態(tài),也是指活動精子的質量。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦將精子活動力分為4級:①精子活動好,運動迅速,活潑有力,直線向前運動;②精子活動較好,運動速度尚可,游動方向不定,呈直線或非直線運動,帶有回旋;③精子運動不良,運動遲緩,原地打轉或抖動,向前運動能力差;④死精子,精子完全不活動。正常精子活動力應在③級以上,若>40%的精子活動不良(③、④)級,常是導致男性不育的重要原因。精子活動力低,主要見于精索靜脈曲張、泌尿生殖系統(tǒng)非特異性***,應用某些藥物如抗瘧藥、雄***等所致。
CASA系統(tǒng)進行**分析應注意以下幾點:3.2**分析儀閾值的確定(1)精子灰度、對比度閾值:由于分析儀是根據(jù)灰度的高低來判斷精子的真?zhèn)危瑢α炼群蛯Ρ榷纫筇貏e高,檢測時應多次試用,尋找能準確識別精子的比較好灰度閾值[8]。(2)碎片:測定精子濃度準確性受**中細胞成份和非精子的顆粒物質的干擾,測定活動精子的百分率也受精子中非精子物質的影響[9],這些也是需要注意的。對于系統(tǒng)誤認為精子的非精子成分,如精原細胞、白細胞和非白細胞顆粒等,可人為準確記數(shù)后在可刪除雜質一欄將其舍去。3.3出現(xiàn)1次異常結果應間隔復查反復檢查2?3次方能得出比較正確的結果。3.4對于無精子的患者應仔細進行視野檢查注意不要將雜質誤認為精子計數(shù)在內,應將**3000ɡ離心15分鐘后,再涂片檢查,確認無精后再出報告。Hamilton Thorne精子分析儀具有良好的數(shù)據(jù)管理和報告生成功能,能夠方便用戶查閱和分享分析結果。
精子手工計數(shù)原理及操作方法1.原理:將精液用適當?shù)南♂屢鹤饕欢肯♂尯螅靹蜃⑷胗嫈?shù)池內計數(shù),再算出每毫升精液中精子數(shù)。2.方法(按照***版第四版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》)1).于小試管內加精子稀釋液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀釋液內混勻。2).充分搖勻后,滴入改良Neubauer計數(shù)板的計數(shù)池內,靜置1~2分鐘,待精子下沉后,以精子頭部作為基準進行計數(shù)。3.計算1).如每個**中方格內精子少于10個,應計數(shù)所有25個中方格內的精子數(shù)。2).如每個**中方格內精子在10~40個,應計10個中方格內的精子數(shù)。3).如每個**中方格內精子多于40個,應計數(shù)5個中方格內的精子數(shù)。公式:精子數(shù)=計數(shù)結果/計數(shù)中方格×25×1/計數(shù)池高度×20×103/ml=計數(shù)結果/計數(shù)中方格×1/計數(shù)池高度×5×103/mlCASA系統(tǒng)主要用于精子動力學的分析,可以評估精子的濃度、活力等參數(shù)。廣州馬精子分析VCL
精子分析儀參數(shù),平均路徑速率(VAP)?:精子頭沿其平均路徑移動時的時均速率。南京前向運動精子分析LIN
通過比較進行質量評估1.室內比較是采用同一個標本在同一參數(shù)下?經CASA多次測定后?應用適當?shù)慕y(tǒng)計學方法對測得數(shù)值進行比較。在男科實驗室中對CASA系統(tǒng)的質量控制通常使用影像磁帶或完全相同的凍存**標本進行日間比較。當室內比較作為結果質量的一種評估時?計算機中數(shù)值的在線獲得是極具優(yōu)勢的。2.室間比較要求標本向其他幾個實驗室運送文獻中的一些報道闡述了該方面的經驗但是運動精子是不能在不受限制的條件下運輸?shù)膶⑵渲糜谝旱羞\送需進一步考慮更多的因素(解凍技術、標本的處理等)這些因素會影響活動力參數(shù);到目前為止室間比較的研究還未見滿意報道;Jorgensen等進行了研究嘗試克服實驗室間運送解凍標本的困難其研究方式是:邀請四個實驗室的實驗人員攜帶各自的儀器到同一個地點以各自通常采用的實驗方法進行精子評估但未見明確的結論。3.對于精子活力測定CASA系統(tǒng)的測定與直觀評估的比較有文獻進行了報道但結果并不相同。認為直觀評估揭示標準數(shù)值且其差異是由CASA系統(tǒng)的錯誤引起的該觀點是不正確的;無論從理論上還是實踐中CASA數(shù)值比直觀評估所獲得的數(shù)值更接近于真值;對直線前進的精子比例而言這一點是非常正確的。南京前向運動精子分析LIN