翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析：蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細(xì)胞不同生長時(shí)期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化，許多至關(guān)重要的生命進(jìn)程不只由蛋白質(zhì)相對豐度控制，更重要的是被時(shí)空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控，因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個(gè)重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時(shí)其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變，通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時(shí)，發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣，所以在質(zhì)譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進(jìn)行富集。蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)磷酸化修飾具有簡單的特性。棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)：蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性，以及磷酸基團(tuán)的供體ATP的易得性，使得磷酸化修飾被真核細(xì)胞所選擇接受成為一種比較普遍的調(diào)控手段。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程，幾乎調(diào)節(jié)著包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育、分化、細(xì)胞骨架調(diào)控、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)活動、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動的所有過程，并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的比較主要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方式。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起，而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果。南京氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)錢質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一。

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過程的重要方式，幾乎在每個(gè)細(xì)胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在，這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對其的檢測。因此，要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白，純化方法是必要的，以分離修飾蛋白和肽段，然后再進(jìn)行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行，可以對翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析：在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中，蛋白會首先被酶切成肽段，然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。通過質(zhì)譜分析，得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對于某一個(gè)特定肽段而言，在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下，其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后，例如磷酸化修飾，由于序列信息和分子量是確定的，磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測過程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量，假設(shè)這個(gè)肽段就發(fā)生了磷酸化修飾，再通過二級質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。

翻譯后修飾蛋白的檢測方法：翻譯后修飾蛋白的檢測技術(shù)包括有免疫沉淀、western blot、質(zhì)譜技術(shù)、體外生化分析等。其中，免疫沉淀是大多數(shù)翻譯后修飾檢測中的關(guān)鍵步驟，它利用蛋白特異性抗體或某種翻譯后修飾的特異性抗體來富集目標(biāo)蛋白，之后再用western blot或質(zhì)譜技術(shù)分析目標(biāo)蛋白。Western blot和質(zhì)譜技術(shù)均可用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的下游檢測，其中Western blot相對簡單但依賴于特異性抗體且無法識別單個(gè)蛋白質(zhì)變化，質(zhì)譜則可以檢測包括未知PTM在內(nèi)的幾乎所有的PTMs但成本更高需要專業(yè)知識來分析產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)。研究人員可以根據(jù)成本、有無可用抗體，以及有沒有目標(biāo)等選擇合適的方法進(jìn)行檢測。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中，蛋白會首先被酶切成肽段，然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。濟(jì)南琥珀?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析方法

常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化。棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾：相對于蛋白質(zhì)印跡等技術(shù)，質(zhì)譜技術(shù)能更有效的對蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進(jìn)行分析，且可以對常規(guī)的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進(jìn)行補(bǔ)充。質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的質(zhì)譜方法無法保證可以完全識別目的蛋白的特定翻譯后修飾，因?yàn)橘|(zhì)譜是通過蛋白質(zhì)序列內(nèi)的多個(gè)肽段來鑒定的，這很大程度上降低了翻譯后修飾肽段被識別的機(jī)會。一種提高質(zhì)譜儀檢測到修飾肽段數(shù)量的策略是使用PTM親和試劑進(jìn)行肽段富集，而不是使用PTM親和試劑進(jìn)行蛋白富集，這將減少富集的未修飾肽段的數(shù)量。棕櫚酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

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