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轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:海洋水產(chǎn):生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,漁業(yè)資源,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等;微生物:致病機(jī)理,耐藥機(jī)制,病原體-宿主相互作用研究等;生物醫(yī)藥:生物標(biāo)志物,疾病機(jī)理機(jī)制,疾病分型,藥物開(kāi)發(fā),個(gè)性化醫(yī)治等;環(huán)境科學(xué):發(fā)酵過(guò)程優(yōu)化,生物燃料生產(chǎn),環(huán)境危害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究等;食品科學(xué):食品儲(chǔ)藏及加工條件優(yōu)化,食品組分及品質(zhì)鑒定,功能性食品開(kāi)發(fā),食品安全監(jiān)檢測(cè)等。轉(zhuǎn)錄組是特定發(fā)育階段或生理?xiàng)l件下細(xì)胞內(nèi)的完整轉(zhuǎn)錄信息的匯合,表示了基因表達(dá)的中間狀態(tài)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于非生物環(huán)境關(guān)系研究、植物與微生物、在表型鑒定中的應(yīng)用、代謝途徑及功能基因組研究。廣州高通量轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析
轉(zhuǎn)錄組及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq):轉(zhuǎn)錄組即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)主要通過(guò)高通量測(cè)序研究特定組織或細(xì)胞在某個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)錄出來(lái)的mRNA的表達(dá)量,進(jìn)而對(duì)相關(guān)基因和表型的關(guān)系進(jìn)行分析。本質(zhì)上講RNA-seq就是在用一種新的方法實(shí)現(xiàn)“基因決定性狀”的經(jīng)典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達(dá)分析的主要技術(shù)是基因芯片,不過(guò)由于高通量測(cè)序成本的下降,RNA-seq的運(yùn)用愈來(lái)愈普遍。廣東單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析方法轉(zhuǎn)錄組學(xué)是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序比其他研究方法有哪些優(yōu)勢(shì)?(1)可以直接測(cè)定每個(gè)轉(zhuǎn)錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準(zhǔn)確度,同時(shí)不存在傳統(tǒng)微陣列雜交的熒光模擬信號(hào)帶來(lái)的交叉反應(yīng)和背景噪音問(wèn)題;(2)靈敏度高,可以檢測(cè)細(xì)胞中少至幾個(gè)拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本;(3)可以對(duì)任意物種進(jìn)行全基因組分析,無(wú)需預(yù)先設(shè)計(jì)特異性探針,因此無(wú)需了解物種基因信息,能夠直接對(duì)任何物種進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析,同時(shí)能夠檢測(cè)未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本,并準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切位點(diǎn)及cSNP,UTR區(qū)域。
普通轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序適用于哪些情況?普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主要適用于兩大類(lèi):一是不同的生長(zhǎng)階段或者發(fā)育過(guò)程;二是不同的環(huán)境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序必須做生物學(xué)重復(fù)么?需要幾個(gè)重復(fù)?生物學(xué)重復(fù)是生物實(shí)驗(yàn)所必須的,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序也不例外,至少3次生物學(xué)重復(fù)。準(zhǔn)備生物重復(fù)樣品時(shí),通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)的預(yù)先設(shè)計(jì)和控制,盡可能將與實(shí)驗(yàn)處理無(wú)關(guān)的背景條件控制在同一水平,減少批次效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序可以同時(shí)測(cè)到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?我們通常所講的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序只能測(cè)到mRNA。但是全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序通過(guò)構(gòu)建兩個(gè)測(cè)序文庫(kù)(一是小RNA測(cè)序文庫(kù)、二是lncRNA測(cè)序文庫(kù))是可以測(cè)到以上4種RNA的。普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主要適用于不同的環(huán)境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)的作用:轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可以對(duì)所有轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行分類(lèi)、確定基因的轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)、量化轉(zhuǎn)錄物的表達(dá)水平。蛋白質(zhì)是生命功能的直接執(zhí)行者,蛋白組是一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。整合轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的表達(dá)數(shù)據(jù)對(duì)生物樣本進(jìn)行研究,可以從整體上解釋生物學(xué)問(wèn)題,探究生物體生理和疾病機(jī)理等。轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用于胃腸瘤發(fā)生機(jī)制研究:利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)可檢測(cè)瘤細(xì)胞惡化過(guò)程中的RNA(編碼RNA及非編碼RNA)的變化,有助于更好地理解胃腸瘤的發(fā)生機(jī)制。circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)一類(lèi)具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子。南京全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄學(xué)組研究
宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)適用范圍包括人體微生態(tài)、環(huán)境、工業(yè)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。廣州高通量轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù):Anydeplete技術(shù)首先通過(guò)隨機(jī)引物進(jìn)行一鏈合成,一鏈合成引入核苷酸類(lèi)似物,用于酶切打斷,二鏈合成同樣引入核苷酸類(lèi)似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭,接頭一條鏈也帶有核苷酸類(lèi)似物,用于酶切降解。當(dāng)形成單鏈文庫(kù)后,設(shè)計(jì)特異性引物與rRNA形成文庫(kù)結(jié)合,一輪退火延伸,rRNA文庫(kù)形成雙鏈結(jié)構(gòu)。Reverseadaptor上帶有特異的酶切位點(diǎn),當(dāng)形成雙鏈結(jié)構(gòu)酶切位點(diǎn)被識(shí)別,切去接頭,這樣rRNA形成的文庫(kù)不帶有完整的接頭,而其他文庫(kù)帶有完整接頭,通過(guò)PCR擴(kuò)增富積既能得到想要的信息,包含mRNA及LncRNA信息。同樣Anydeplete技術(shù)與10×genomics技術(shù)一樣,包含分子標(biāo)簽,可分析duplication及PCR產(chǎn)生突變位點(diǎn)。廣州高通量轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析