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磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù):蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡(jiǎn)單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團(tuán)的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細(xì)胞所選擇接受成為一種比較普遍的調(diào)控手段。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過(guò)程,幾乎調(diào)節(jié)著包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育、分化、細(xì)胞骨架調(diào)控、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)活動(dòng)、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動(dòng)的所有過(guò)程,并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的比較主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果。乙?;揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對(duì)蛋白乙?;b定的影響。武漢蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)一般流程
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過(guò)高質(zhì)量的修飾類抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集,之后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析,通過(guò)相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配,一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)分析樣品經(jīng)酶解后,用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M(jìn)行富集,富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析,并通過(guò)軟件完成數(shù)據(jù)檢索。琥珀酰化修飾蛋白質(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。貴陽(yáng)磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有探索性。
根據(jù)不同的作用位點(diǎn),蛋白質(zhì)乙酰化修飾分為:發(fā)生在蛋白N端的乙?;揎?、發(fā)生在蛋白賴氨酸上的乙?;揎?。前者發(fā)生在90%以上的真核生物新生蛋白上,對(duì)于新生蛋白的成熟和細(xì)胞定位非常重要,由N乙酰轉(zhuǎn)移酶(NATs)負(fù)責(zé);而后者是一個(gè)可逆的過(guò)程,主要由賴氨酸乙?;福↘ATs)和賴氨酸去乙?;福↘DACs),賴氨酸的乙?;揎検俏覀兡壳把芯康闹攸c(diǎn)。蛋白質(zhì)磷酸化修飾應(yīng)用領(lǐng)域:應(yīng)用在食品工業(yè)方面,通過(guò)人工翻譯磷酸化修飾的蛋白可以普遍用于各種食用蛋白質(zhì)的改性,以改善蛋白質(zhì)品質(zhì)。如,花生蛋白、大豆蛋白、小麥面筋蛋白等。在人工磷酸化修飾的方法下,也可以研究各種蛋白質(zhì)的功能和相關(guān)代謝途徑的調(diào)控。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,蛋白質(zhì)的磷酸化紊亂,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控異常,因此,病理的形成與蛋白質(zhì)的磷酸化異常也有很大相關(guān)性。其分子機(jī)制問(wèn)題對(duì)于病癥等重大疾病的研究具有相當(dāng)?shù)闹笇?dǎo)意義,這也是指當(dāng)之無(wú)愧地成為生物學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長(zhǎng)的不同時(shí)期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,許多生命過(guò)程不僅受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制,還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見(jiàn)的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來(lái)了很大的挑戰(zhàn)。基于翻譯后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn),主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。蛋白質(zhì)乙酰化也是一種可逆的酶促反應(yīng)過(guò)程。
磷酸化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用:蛋白質(zhì)組(Proteome)泛指一個(gè)生命體內(nèi)所有蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué),是對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性、定量及功能的分析。定性分析包括鑒定蛋白質(zhì)的序列、PTM及蛋白之間的相互作用,對(duì)比來(lái)看,磷酸化蛋白質(zhì)組(Phosphoproteome)就是蛋白質(zhì)組中全部的磷酸化蛋白質(zhì),而磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)(Phosphoproteomics,下文簡(jiǎn)稱PP)就是針對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)的全方面的分析,包括對(duì)磷酸化的鑒定、定位和定量。本來(lái)屬于蛋白質(zhì)組學(xué)的一個(gè)分支,但隨著研究的深入,人們?cè)诟鱾€(gè)領(lǐng)域關(guān)于PP都有重大發(fā)現(xiàn),基于PP的研究也越來(lái)越多。蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?哈爾濱亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)研究
乙?;揎棇?duì)細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著非常重要的作用。武漢蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)一般流程
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過(guò)程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過(guò)給蛋白質(zhì)添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過(guò)程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過(guò)程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點(diǎn))在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。武漢蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)一般流程