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貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定

來源: 發(fā)布時間:2022-04-19

翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能團增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機理的幾乎所有方面。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)降解、信號傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點)在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要。乙?;揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響。貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定

琥珀酰化修飾蛋白質(zhì)組:蛋白質(zhì)琥珀?;╯uccinylation)修飾是指琥珀?;鶊F供體(如琥珀酰輔酶A)通過酶學(xué)或者非酶學(xué)的方式將琥珀?;鶊F共價結(jié)合到底物蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基的過程。琥珀?;揎椯x予賴氨酸基團2個負(fù)電荷,能夠引發(fā)更多蛋白質(zhì)特性的改變,且琥珀?;鶊F空間結(jié)構(gòu)較大,對于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響更為明顯。在真核和原核生物中,琥珀?;且环N保守的修飾類型。琥珀?;鸵阴;哂蟹浅姷南嚓P(guān)性,在已有的研究中,大量發(fā)生琥珀酰化的位點同時也能檢測到乙?;揎?。琥珀酰化參與了很多關(guān)鍵能量代謝途徑(包括三羧酸循環(huán)、糖代謝等),影響線粒體中的代謝過程,對線粒體失調(diào)相關(guān)的疾病的研究具有重要價值。江蘇蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)質(zhì)譜分析研究蛋白質(zhì)磷酸化對闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (Protein translational modifications,PTMs) 通過功能基團或蛋白質(zhì)的共價添加、調(diào)節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個蛋白質(zhì)的降解來增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性。這些修飾包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解,幾乎影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機制的所有方面。因此,識別和理解 PTM 在細(xì)胞生物學(xué)和疾病療理和預(yù)防的研究中至關(guān)重要。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進一步促進了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加。PTMs 是一種化學(xué)修飾,在功能蛋白質(zhì)組中發(fā)揮關(guān)鍵作用,因為它們調(diào)節(jié)活性、定位以及與其他細(xì)胞分子(如蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和輔助因子)的相互作用。

乙酰化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用方向:1、乙酰化修飾與細(xì)胞基因表達調(diào)控、表觀調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過程研究。2、乙?;鸬拇x疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機理研究。乙?;飳W(xué)意義:1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3、調(diào)節(jié)酶活性;4、調(diào)控蛋白亞細(xì)胞定位。生物領(lǐng)域各個研究方面,如:1、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機制,生長發(fā)育機制,育種保護研究等;2、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機理研究等。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性。

泛素化修飾PRM定量驗證:原理: 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動。首先對泛素化的蛋白進行胰酶消化,在賴氨酸的修飾位點上會產(chǎn)生兩個甘氨酸的殘基(K-GG),利用對泛素化賴氨酸(K-GG)具有高親和力的基序抗體,特異性富集復(fù)雜樣本中的泛素化肽段,結(jié)合LC-MS/MS蛋白質(zhì)定量方法,實現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質(zhì)定性定量分析。在細(xì)胞中,乙?;揎椀姆磻?yīng)由乙酰基轉(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙酰基轉(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定

蛋白磷酸化修飾過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上。貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的作用:泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,作為近年來生物化學(xué)研究的一個重大成果,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點。技術(shù)原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進行分析定量。技術(shù)優(yōu)勢:高特異性的修飾抗體;高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀;鑒定通量高;可與代謝組學(xué)等進行多組學(xué)聯(lián)合分析。貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定