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哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

來源: 發(fā)布時間:2022-04-20

蛋白質(zhì)組學(xué)概念:蛋白質(zhì)組學(xué)(英語:proteomics,又譯作蛋白質(zhì)體學(xué)),是以蛋白質(zhì)組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個詞的組合,意指“一種基因組所表達的全套蛋白質(zhì)”,即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,包括蛋白質(zhì)的表達水平,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。蛋白質(zhì)組學(xué),指對某一基因組所表達的所有蛋白質(zhì)及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

蛋白組究竟研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達量與實際對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,經(jīng)過平均后r值只為0.4。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨特優(yōu)勢。蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙酰化等等,也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。武漢定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)組學(xué)可以通過系統(tǒng)性地研究蛋白質(zhì)表達和翻譯后修飾變化對疾病的影響。

iTRAQ/TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)優(yōu)勢:1、結(jié)果可靠:基于高靈敏度和高分辨的串聯(lián)質(zhì)譜方法,定性與定量同步進行,同時得出定性和定量結(jié)果,重復(fù)樣品間的蛋白表達量相關(guān)性高;2、靈敏度高:分級分離,降低樣品復(fù)雜度,相比凝膠電泳觀測到的蛋白變化在2倍以上,iTRAQ計算出的蛋白變化在1.3-1.6倍之間,可檢測低豐度蛋白;3、分離能力強:可分離出酸/堿性蛋白,小于10KDa或大于200KDa的蛋白、難溶性蛋白等;4、自動化程度高:液質(zhì)聯(lián)用,自動化操作,分析速度快,分離效果好。

非標(biāo)定量法(Label-free)是通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化,認為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測計數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質(zhì)進行定量。按照其原理主要分為兩種,第1種spectrumcounts類的非標(biāo)記方法,發(fā)展比較早,已經(jīng)形成多種定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ),各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標(biāo)記定量的原理是以MS1為基礎(chǔ),計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進行相關(guān)研究和日常工作。

蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)現(xiàn)已被普遍應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域,對理解細胞生長、分化、代謝、衰老與病變有著重要作用。尤其在疾病的研究中,蛋白質(zhì)組學(xué)可以通過系統(tǒng)性地研究蛋白質(zhì)表達和翻譯后修飾變化對疾病的影響,從而在分子層面對疾病進行分型,以起到對個性化療理研究的積極推進作用。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用是當(dāng)今迅猛發(fā)展的研究領(lǐng)域之一,隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的不斷進步和普遍應(yīng)用,基于蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的醫(yī)療有望在不久的將來應(yīng)用于大規(guī)模的臨床實踐中。蛋白質(zhì)組(Proteome)一詞,源于蛋白質(zhì)(protein)與基因組(genome)兩個詞的組合。武漢定量蛋白組學(xué)質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐,并將帶領(lǐng)生物技術(shù)取得關(guān)鍵性的突破。為幫助生命科學(xué)領(lǐng)域的工作者全方面掌握蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)與方法、實驗難點與關(guān)鍵點、研究前沿與熱點,包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質(zhì)譜分析及非凝膠技術(shù)。雙向凝膠電泳:雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質(zhì)的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上分開。由于雙向電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)組與醫(yī)學(xué)研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后修飾研究,蛋白質(zhì)組的比較和蛋白質(zhì)間的相互作用,細胞分化凋亡研究,致病機制及耐藥機制的研究,療效監(jiān)測,新藥開發(fā),病癥研究,蛋白純度檢查,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來經(jīng)過多方面改進已成為研究蛋白質(zhì)組的比較有使用價值的關(guān)鍵方法。哈爾濱PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法