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蛋白質(zhì)組學(xué)有什么用,能給我實(shí)驗(yàn)帶來什么?可以大規(guī)模鑒定特定組織、細(xì)胞等各種樣本的蛋白質(zhì)種類、修飾狀態(tài)以及蛋白質(zhì)之間的相互作用,以及對(duì)這些蛋白質(zhì)功能分析、分類;可以對(duì)不同條件下某一特定樣本進(jìn)行大規(guī)模的蛋白質(zhì)(包括翻譯后修飾蛋白)表達(dá)量變化分析,篩選潛在biomarker,篩選重要信號(hào)通路;依托大樣本量,可以實(shí)現(xiàn)疾病的分子分型分析、重要潛在靶標(biāo)鑒定。質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)和芯片哪個(gè)更好出結(jié)果?若有對(duì)應(yīng)物種的全基因組并有預(yù)測的全蛋白序列庫,可優(yōu)先選擇全蛋白序列庫;若無全蛋白序列庫,有對(duì)應(yīng)物種對(duì)應(yīng)組織的轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果并,可以使用轉(zhuǎn)錄組的測序結(jié)果(mRNA三框翻譯或者預(yù)測CDS,并翻譯成氨基酸序列);若基因組、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫都沒有,優(yōu)先選擇同源性比較接近的物種的全蛋白數(shù)據(jù)庫,若近源物種沒有合適的全蛋白庫,則選擇更大的蛋白全庫(如動(dòng)物全庫、綠色植物全庫、微生物庫等)。蛋白質(zhì)組學(xué)為農(nóng)業(yè)作物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供巨大的參考價(jià)值。江蘇外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用
蛋白質(zhì)組學(xué)介紹:蛋白質(zhì)組學(xué),指對(duì)某一基因組所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)及其特征進(jìn)行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復(fù)雜的生命活動(dòng)的分子網(wǎng)絡(luò)。研究的內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征、蛋白質(zhì)的豐度、蛋白質(zhì)活性、蛋白質(zhì)的修飾、亞細(xì)胞定位和三維結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對(duì)蛋白質(zhì)的高階復(fù)合物結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)組主要通過蛋白質(zhì)雙向電泳、氨基酸序列測定、質(zhì)譜、生物信息等方法,研究某個(gè)基因組對(duì)應(yīng)的所有蛋白質(zhì)特征,包括蛋白質(zhì)含量、亞細(xì)胞定位、活性以及蛋白修飾等內(nèi)容。江蘇TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測多少錢蛋白質(zhì)組意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”,即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):飛行時(shí)間質(zhì)譜:MALDI的基本原理是將分析物分散在基質(zhì)分子(尼古丁酸及其同系物)中并形成晶體,當(dāng)用激光(337nm的氮激光)照射晶體時(shí),基質(zhì)分子吸收激光能量,樣品解吸附,基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使樣品分子電離。它從固相標(biāo)本中產(chǎn)生離子,并在飛行管中測定其分子量,MALDI-TOF-MS一般用于肽質(zhì)量指紋圖譜,非常快速(每次分析只需3~5min),靈敏(達(dá)到fmol水平),可以精確測量肽段質(zhì)量,但是如果在分析前不修飾肽段,MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。
蛋白質(zhì)組學(xué)的重要應(yīng)用領(lǐng)域有:在臨床疾病中的應(yīng)用、在微生物蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用、在植物研究中的應(yīng)用、在腎臟病學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。我們通過研究蛋白質(zhì)組,可以為患者提供有用的疾病診斷、預(yù)后評(píng)估信息;可以早期更為準(zhǔn)確的診斷出胰腺??;也可以為AD的診斷、治理藥物的設(shè)計(jì)和篩選奠定基礎(chǔ)。這項(xiàng)研究技術(shù)其實(shí)離我們生活非常近,對(duì)我們生命而言尤為重要。近年來,高通量蛋白質(zhì)分離與鑒定技術(shù),如雙向電泳、生物質(zhì)譜、蛋白質(zhì)芯片、酵母雙雜交系統(tǒng)、生物信息學(xué)等相繼建立并日趨完善,加速了蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展。Label Free 非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)處理步驟簡單,成本低。
常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué):Labelfree多肽組學(xué):顧名思義,就是不使用任何標(biāo)記方法,直接對(duì)肽段進(jìn)行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析。實(shí)驗(yàn)流程簡單,只需要對(duì)蛋白進(jìn)行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機(jī)。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計(jì)數(shù)(Spectralcount),常用的是峰面積。不過,由于質(zhì)譜采集時(shí)只選取topN的母離子進(jìn)行二級(jí)碎裂和MS2檢測,所以會(huì)丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白組學(xué):TMT全稱是TandemMassTag,是經(jīng)典化學(xué)標(biāo)記試劑,普遍用于差異表達(dá)蛋白質(zhì)組分析研究中。該技術(shù)采用6重、10重或16重同位素標(biāo)簽,與肽段的氨基發(fā)生共價(jià)結(jié)合反應(yīng),可實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)6個(gè)/10個(gè)/16個(gè)不同樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。(目前16標(biāo)鹿明生物可提供技術(shù)服務(wù))。蛋白質(zhì)組的概念指由一個(gè)基因組,或一個(gè)細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法
DIA 定量蛋白質(zhì)組學(xué)是高通量,能同時(shí)監(jiān)測所有目標(biāo)蛋白。江蘇外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):電噴霧質(zhì)譜:ESI-MS是利用高電場使質(zhì)譜進(jìn)樣端的毛細(xì)管柱流出的液滴帶電,在N2氣流的作用下,液滴溶劑蒸發(fā),表面積縮小,表面電荷密度不斷增加,直至產(chǎn)生的庫侖力與液滴表面張力達(dá)到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,這一過程不斷重復(fù)使液滴非常細(xì)小呈噴霧狀,這時(shí)液滴表面的電場非常強(qiáng)大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進(jìn)入質(zhì)量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子,一般說來,肽段的混合物經(jīng)過液相色譜分離后,經(jīng)過偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質(zhì)譜分析,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時(shí)間一般較長。目前,許多實(shí)驗(yàn)室兩種質(zhì)譜方法連用,獲得有意義的蛋白質(zhì)的肽段序列,設(shè)計(jì)探針或引物來獲得有意義的基因。隨著蛋白質(zhì)組研究的深入,又有多種新型質(zhì)譜儀出現(xiàn),主要是在上述質(zhì)譜儀的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)與重新組合。江蘇外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用