蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問題?覆蓋率:覆蓋率越高,檢測(cè)和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點(diǎn)的占有率:被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低,則檢測(cè)到修飾肽的機(jī)會(huì)會(huì)隨之減少。如果百分比較高(> 30%),則有助于識(shí)別修飾位點(diǎn)。棕櫚?;鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法:S-棕櫚酰化的主要功能是促進(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個(gè)棕櫚?;M成,也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì),如豆蔻酰基。由于對(duì)S-棕櫚酰化蛋白分析仍然具有挑戰(zhàn)性,由于S-棕櫚?;揎椀鞍讈喫揭约笆杷院蜐撛诓环€(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂酰化肽。在細(xì)胞中,乙?;揎椀姆磻?yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。南京亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格
乙?;揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向:1、乙?;揎椗c細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控、表觀調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過程研究。2、乙?;鸬拇x疾病、代謝紊亂發(fā)生等疾病機(jī)理研究。乙酰化生物學(xué)意義:1、調(diào)節(jié)DNA-蛋白、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk;3、調(diào)節(jié)酶活性;4、調(diào)控蛋白亞細(xì)胞定位。生物領(lǐng)域各個(gè)研究方面,如:1、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機(jī)制,生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,育種保護(hù)研究等;2、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機(jī)理研究等。四川蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)主要技術(shù)蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理:盡管質(zhì)譜儀器的分析能力近年來有了長(zhǎng)足的發(fā)展,但是由于蛋白翻譯后修飾化學(xué)計(jì)量值低、復(fù)雜性大,直接將蛋白組(如全細(xì)胞裂解產(chǎn)物,組織勻漿產(chǎn)物或全血清蛋白)的酶解肽段送入質(zhì)譜鑒定和定量PTM是非常困難的。因此,很多翻譯后修飾的富集方法會(huì)被采用,來提高樣品中PTM肽段的豐度和相對(duì)比例,從而提高了質(zhì)譜對(duì)翻譯后修飾位點(diǎn)的鑒定效率。研究發(fā)現(xiàn)在泛素化修飾的蛋白在tyrpsin的作用下都會(huì)產(chǎn)生diGly位點(diǎn)。基于這一特異性,利用針對(duì)蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTM)基序(motif)抗體,在肽段水平上免疫親和富集帶有泛素化修飾的肽段,利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進(jìn)行定量分析,能夠快速、準(zhǔn)確、高通量地分析多種疾病相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)蛋白修飾的變化,滿足創(chuàng)新性研究、生物標(biāo)志物鑒定、藥物靶點(diǎn)篩選和評(píng)價(jià)的需求。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長(zhǎng)的不同時(shí)期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,許多生命過程不僅受蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度控制,還受時(shí)空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)復(fù)雜的過程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)?;诜g后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對(duì)豐度低的特點(diǎn),主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位。
甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域:基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床診斷:生物標(biāo)志物,疾病機(jī)理機(jī)制,疾病分型,個(gè)性化治理等;生物醫(yī)藥:藥物作用機(jī)理,藥效評(píng)價(jià),藥物開發(fā)等;農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機(jī)制,生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,育種保護(hù)研究等;畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,致病機(jī)理研究等;微生物領(lǐng)域:致病機(jī)理,耐藥機(jī)制,病原體-宿主相互作用研究等;海洋水產(chǎn):漁業(yè)資源,海水養(yǎng)殖,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等。技術(shù)優(yōu)勢(shì):采用抗體,特異性高;鑒定通量高, 一次可檢測(cè)高可達(dá)上千個(gè)甲基化修飾位點(diǎn)。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能。四川蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)主要技術(shù)
蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個(gè)共價(jià)加工過程。南京亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格
蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué):乙?;揎検侵冈诿富蚍敲缸饔孟拢瑢⒁阴oA的乙?;鶊F(tuán)轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)氨基酸的殘基上。蛋白質(zhì)乙?;彩且环N可逆的酶促反應(yīng)過程。乙?;D(zhuǎn)移酶可以將乙酰基團(tuán)(CH3C=O)從乙酰輔酶A轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)。同理,去乙?;竸t可以逆轉(zhuǎn)這種反應(yīng)。蛋白質(zhì)上的賴氨酸乙?;羌?xì)胞內(nèi)一種重要的PTMs過程。不僅發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等上,在細(xì)胞質(zhì)和線粒體中也存在著諸多蛋白的乙酰化修飾。在植物研究領(lǐng)域內(nèi),乙酰化修飾主要參與植物光合作用、生長(zhǎng)發(fā)育、脅迫響應(yīng)等過程。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,乙?;揎椏烧{(diào)節(jié)人體內(nèi)某種代謝酶,控制糖尿病,這一發(fā)現(xiàn)為糖尿病干預(yù)與療理帶來新的希望。南京亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析價(jià)格