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PRM靶向定量蛋白質組學實驗原理:PRM技術是一種根據(jù)已知實測信息或質譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質進行靶向定量的技術。該技術主要應用儀器為Q Exactive系列質譜儀,首先以四極桿作為質量過濾器,特異性地選擇與預先設定質荷比相同的肽段離子(母離子)通過,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術的結合使得PRM技術有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。蛋白質組學研究的首要任務是建立獲取和分析蛋白質的常規(guī)、可靠、有效的技術。貴陽蛋白質組學研究內容
蛋白質組學技術:電噴霧質譜:ESI-MS是利用高電場使質譜進樣端的毛細管柱流出的液滴帶電,在N2氣流的作用下,液滴溶劑蒸發(fā),表面積縮小,表面電荷密度不斷增加,直至產(chǎn)生的庫侖力與液滴表面張力達到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,這一過程不斷重復使液滴非常細小呈噴霧狀,這時液滴表面的電場非常強大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進入質量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子,一般說來,肽段的混合物經(jīng)過液相色譜分離后,經(jīng)過偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質譜分析,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時間一般較長。目前,許多實驗室兩種質譜方法連用,獲得有意義的蛋白質的肽段序列,設計探針或引物來獲得有意義的基因。隨著蛋白質組研究的深入,又有多種新型質譜儀出現(xiàn),主要是在上述質譜儀的基礎上進行改進與重新組合。四川新型修飾蛋白組學研究內容蛋白質組學研究策略有什么?
非標定量法(Label-free)是通過比較質譜分析次數(shù)或質譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化,認為肽段在質譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關,因此蛋白質被質譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質的豐度,通過適當?shù)臄?shù)學公式可以將質譜檢測計數(shù)與蛋白質的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質進行定量。按照其原理主要分為兩種,第1種spectrumcounts類的非標記方法,發(fā)展比較早,已經(jīng)形成多種定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鑒定結果為定量基礎,各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標記定量的原理是以MS1為基礎,計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。
蛋白質組學的介紹:蛋白組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系。蛋白質組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。修飾蛋白組學(定量磷酸化修飾組學、定量糖基化修飾蛋白組學、定量乙酰化修飾蛋白組學和定量泛素化修飾蛋白組學)。蛋白質組研究為疾病的診斷、疫苗及新藥開發(fā)提供科學依據(jù)。
蛋白質組(Proteome)的概念指由一個基因組(genome),或一個細胞、組織表達的所有蛋白質(Protein).蛋白質組的概念與基因組的概念有許多差別,它隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變.在轉錄時,一個基因可以多種mRNA形式剪接,并且,同一蛋白可能以許多形式進行翻譯后的修飾.故一個蛋白質組不是一個基因組的直接產(chǎn)物,蛋白質組中蛋白質的數(shù)目有時可以超過基因組的數(shù)目.蛋白質組學(Proteomics)處于早期“發(fā)育”狀態(tài),這個領域的**否認它是單純的方法學,就像基因組學一樣,不是一個封閉的、概念化的穩(wěn)定的知識體系,而是一個領域.蛋白質組學集中于動態(tài)描述基因調節(jié),對基因表達的蛋白質水平進行定量的測定,鑒定疾病、藥物對生命過程的影響,以及解釋基因表達調控的機制.作為一門科學。蛋白質組研究技術涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等。貴州TMT/iTRAQ標記定量蛋白質組學價格
對人類而言,蛋白質組學的研究終究要服務于人類的健康。貴陽蛋白質組學研究內容
DIA 定量蛋白質組學技術優(yōu)點:采集所有離子及碎片圖譜,重現(xiàn)性好?;谒槠x子定量,選擇性好,可媲美 SPM/MRM。循環(huán)時間固定,掃描點數(shù)均勻,定量準確度高。高通量,能同時監(jiān)測所有目標蛋白。PRM 靶向定量蛋白組:平行反應監(jiān)測(PRM)是一種靶向檢測方法,能夠對目標蛋白、目標肽段進行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標蛋白/肽段進行相對定量。技術優(yōu)點:不依賴抗體;特異性;結果準確、可靠;高通量。修飾蛋白質組學:利用 LC-MS/MS 結合數(shù)據(jù)庫檢索的方法,在搜庫時設置修飾搜庫參數(shù),實現(xiàn)對目標所有已知的修飾位點磷酸化、乙?;⑻腔头核鼗M行鑒定。貴陽蛋白質組學研究內容