蛋白質(zhì)組學研究這樣做:蛋白質(zhì)組與基因組相對應,也是一個整體的概念,隨著基因組學研究的不斷深入,蛋白質(zhì)組學已逐漸成為研究熱點,對蛋白組學的研究可以使我們更容易接近生命的機理本質(zhì),但探究成千上萬的蛋白質(zhì)特性也是一個重大的技術(shù)挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)組(Proteome)指的是某一時刻或某一狀態(tài)基因組表達的所有相應的蛋白,即細胞、組織或機體全部蛋白質(zhì)的存在及活動形式,其是一個動態(tài)概念,它是在組織、細胞的整體蛋白質(zhì)水平上,探索蛋白質(zhì)作用模式、功能機理、調(diào)節(jié)控制以及蛋白質(zhì)群體內(nèi)的相互關(guān)系、從而獲得生命活動調(diào)控網(wǎng)絡的全方面而深入的認識,以揭示生命活動的基本規(guī)律。蛋白質(zhì)組學的研究是生命科學進入后基因時代的特征。PRM定量蛋白質(zhì)組學一般流程
常規(guī)蛋白質(zhì)組學:Labelfree多肽組學:顧名思義,就是不使用任何標記方法,直接對肽段進行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析。實驗流程簡單,只需要對蛋白進行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計數(shù)(Spectralcount),常用的是峰面積。不過,由于質(zhì)譜采集時只選取topN的母離子進行二級碎裂和MS2檢測,所以會丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多。TMT/iTRAQ標記定量蛋白組學:TMT全稱是TandemMassTag,是經(jīng)典化學標記試劑,普遍用于差異表達蛋白質(zhì)組分析研究中。該技術(shù)采用6重、10重或16重同位素標簽,與肽段的氨基發(fā)生共價結(jié)合反應,可實現(xiàn)同時對6個/10個/16個不同樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。(目前16標鹿明生物可提供技術(shù)服務)。廣東蛋白質(zhì)組學價格蛋白質(zhì)組與基因組相對應,也是一個整體的概念。
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標蛋白(或多肽)是什么,設計和建立針對這些目標蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對待測樣品進行PRM數(shù)據(jù)采集,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外,如果配制已知濃度的標準肽段,用PRM額外做一個標準曲線,即可實現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)能應用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實現(xiàn)。具體說來,比如驗證定量蛋白質(zhì)組學中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。
蛋白質(zhì)組學發(fā)展趨勢:技術(shù)發(fā)展方面:蛋白質(zhì)組學的研究方法將出現(xiàn)多種技術(shù)并存,各有優(yōu)勢和的特點,而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強調(diào)各種方法間的整合和互補,以適應不同蛋白質(zhì)的不同特征。另外,蛋白質(zhì)組學與其它學科的交叉也將日益明顯和重要,這種交叉是新技術(shù)新方法的活水之源,特別是,蛋白質(zhì)組學與其它大規(guī)??茖W如基因組學,生物信息學等領(lǐng)域的交叉,構(gòu)成組學(omics)生物技術(shù)研究方法,所呈現(xiàn)出的系統(tǒng)生物學(SystemBiology)研究模式,將成為未來生命科學比較令人激動的新前沿。蛋白質(zhì)組可以隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變。
蛋白組學技術(shù):質(zhì)譜技術(shù)相較于傳統(tǒng)蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)而言,擁有靈敏、準確、高通量、自動化等特點。質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)的基本原理是先將樣品分子離子化,然后根據(jù)不同離子之間的質(zhì)荷比差異來分離并確定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量。根據(jù)蛋白質(zhì)酶解后所得到的肽質(zhì)量指紋圖譜、肽序列標簽、和肽階梯序列去檢索蛋白質(zhì)或核酸序列數(shù)據(jù)庫,質(zhì)譜技術(shù)可達到對蛋白質(zhì)的快速鑒定和高通量篩選。因產(chǎn)生離子的方法不同而發(fā)展起來的質(zhì)譜包括基質(zhì)輔助激光解吸離子化質(zhì)譜、電噴霧離子化質(zhì)譜、表面增強激光解吸離子化質(zhì)譜等。蛋白質(zhì)組學包括蛋白與蛋白相互作用等。廣州新型修飾蛋白組學技術(shù)服務
蛋白質(zhì)組學技術(shù)有電噴霧質(zhì)譜。PRM定量蛋白質(zhì)組學一般流程
蛋白質(zhì)組學,指對某一基因組所表達的所有蛋白質(zhì)及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質(zhì)水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網(wǎng)絡。研究的內(nèi)容主要包括:組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)氨基酸的序列特征、蛋白質(zhì)的豐度、蛋白質(zhì)活性、蛋白質(zhì)的修飾、亞細胞定位和三維結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)之間的相互作用以及對蛋白質(zhì)的高階復合物結(jié)構(gòu)。質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展為這些研究提供了有力的技術(shù)支撐,使得許多有實際應用的蛋白質(zhì)組功能研究成為可能,包括翻譯后修飾的整體分析,蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡的重建和模式生物蛋白表達譜的定量研究;在臨床醫(yī)學和轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究中也越來越多地應用到蛋白質(zhì)組學技術(shù)。PRM定量蛋白質(zhì)組學一般流程
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